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消化法轉化細胞傳代培養(yǎng)操作詳情

閱讀:147          發(fā)布時間:2017-8-14

一. 轉化細胞傳代前準備:

1.預熱培養(yǎng)用液:把已經配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。

2.用75%酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.正確擺放使用的器械:保證足夠的操作空間,不僅便于操作而且可減少污染。

4.點燃酒精燈:注意火焰不能太小。

5.準備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶,放入微波爐內高火,8分鐘再次消毒。

6.取出預熱好的培養(yǎng)用液:取出已經預熱好的培養(yǎng)用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內。

7.從培養(yǎng)箱內取出細胞:注意取出細胞時要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,再在鏡下觀察細胞。

8.打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時要在酒精燈上燒口消毒。

二.轉化細胞胰蛋白酶消化;

1.加入消化液:小心吸出舊培養(yǎng)液,用PBS清洗(沖洗),加入適量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以蓋住細胞,*消化溫度是37℃。

2. 顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察消化細胞,若胞質回縮,細胞之間不再連接成片,表明此時細胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液:棄去胰蛋白酶液,注意更換吸管,加入新鮮的培養(yǎng)液。
95%    Schaftoside    *:    夏佛塔苷    規(guī)格:
98%    curculigoside    *:    仙茅苷    規(guī)格:
98%    Adenosine    *:    腺苷    規(guī)格:
95%    alpha-Methyl-L(+)-tryptophan    *:    相思豆堿    規(guī)格:
98%    Vanillic acid    *:    香草酸    規(guī)格:
≥98%    coumarin    *:    香豆素    規(guī)格:
≥98%    Vanillin    *:    香蘭素    規(guī)格:
≥98%    Typhaneoside    *:    香蒲新苷    規(guī)格:
轉化細胞

 

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