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小鼠骨髓细胞染色体标本制备实验步骤

阅读:1291          发布时间:2017-4-18
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预处理→取股骨→冲洗骨髓→离心→低渗→离心→固定→离心→滴片→染色→观察 

1.预处理:实验前2.5-3小时,按每克体重注射0.02ml,给小白鼠腹腔注射秋水仙素。 
2.取股骨:断颈处死小鼠后,剔去肌肉组织,洗净
3.冲洗骨髓:剪去两端的股骨头,吸取 10ml 2%柠檬酸钠,注射 器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨,洗液收集到10ml的离心管中
4 .离心: 1000r/min 离心10 min ,弃上清
5 .低渗:加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ,中间(约15 min )再吹散一次,使细胞分散,悬浮于溶液中 
6.离心:1000r/min离心10 min,弃上清
7.固定:沉淀加8ml固定液,并用吸管轻 轻吹匀,进行固定,中间(约15 min )再吹散一次
8. 离心: 1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清,轻轻吹打成细胞悬液
9. 滴片:用吸管吸取细胞悬液,高度30-40 cm,滴在预冷的载玻片上,在酒精灯火焰上微微加热,室温晾干 
10. 染色:改良石炭酸品红染色10-20 min
11. 观察:低倍———高倍 

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