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干粉細(xì)胞培養(yǎng)基的配制方式及注意事項(xiàng)
閱讀：5432 發(fā)布時(shí)間：2017-5-18在干細(xì)胞培養(yǎng)基配制過(guò)程中，不同的培養(yǎng)基其溶解性可能有一定的差別，培養(yǎng)基配制過(guò)程中血清、碳酸氫鈉及抗生素等的添加時(shí)間和用量、pH和滲透壓的測(cè)定及酸堿度是否需要調(diào)節(jié)等，都可能影響zui終細(xì)胞培養(yǎng)基性能的發(fā)揮。
（1）配制常規(guī)過(guò)濾除菌粉末細(xì)胞培養(yǎng)基
1) 配制用水：通常選擇制備的超純水器過(guò)濾出的去熱原（細(xì)菌內(nèi)毒素<0.25EU/m）培養(yǎng)基用水（TOC< 10μg/L或者是10mg/L，電阻率：18.2MΩ（25℃））?，F(xiàn)用現(xiàn)制備，隔夜儲(chǔ)存用水（非無(wú)菌）的細(xì)菌內(nèi)毒素及電導(dǎo)率等升高，影響細(xì)胞的增殖和產(chǎn)品的質(zhì)量；
2) 培養(yǎng)基粉劑的稱(chēng)量：小量采用天平稱(chēng)量，要求準(zhǔn)確；大量采用市售大包裝，配制時(shí)可以根據(jù)說(shuō)明；
3) 干細(xì)胞粉劑溶解：溶解充分，觀察有無(wú)顆粒，顏色改變情況等；
4) 過(guò)濾前約半個(gè)小時(shí)（根據(jù)配制量可調(diào)）按使用說(shuō)明添加NaHCO3，充分溶解；
5) 測(cè)定pH，根據(jù)需要用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液來(lái)調(diào)節(jié)pH。過(guò)濾后的pH將會(huì)有所增長(zhǎng)；
6) 定容，檢測(cè)滲透壓；
7) 盡快過(guò)濾、分裝，封好瓶口，避免漏氣，2~8℃保存；
8) 采用一次性濾器時(shí)濾后檢查濾膜，有無(wú)漏、裂、是否很臟或是有未溶解物；采用不銹鋼濾器（內(nèi)置可反復(fù)用的除菌濾芯）需進(jìn)行濾器的完成性檢測(cè)；
9) 過(guò)濾前、中、后三段采樣進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)，同時(shí)，留取樣品置于37℃培養(yǎng)，至該批培養(yǎng)基用完；
10) 完整記錄整個(gè)過(guò)程每一個(gè)步驟，便于追溯。
（2）配制可高壓滅菌粉末細(xì)胞培養(yǎng)基
1) 其配制用水及配制粉劑的稱(chēng)取、及配制程序基本同過(guò)濾型培養(yǎng)基配制方法。溶解后高壓，通常在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
2) 待細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至室溫，按一定比例加入無(wú)菌的谷氨酰胺溶液、無(wú)菌7.5％（w/v）碳酸氫鈉溶液，加注射用水（水溫20℃～30℃）至規(guī)定體積，混勻。
3) 如果必要，用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
4) 干細(xì)胞溶液應(yīng)在2℃－8℃下避光保存。