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TFAR19蛋白的細胞定位分析
閱讀：555 發布時間：2017-3-23人正常組織來源細胞材料試劑：
FITC標記的單克隆抗體，pH7.4 、0.15Mol/L PBS，3%的多聚甲醛，PBS-T(pH7.4 、0.15Mol/L PBS 含0.2% Tween 20)，胎牛血清，熒光細胞洗液：pH7.4 、0.15Mol/L PBS含2%胎牛血清及0.1%NaN3 。FACS管，Tip頭，移液器。
儀器：低溫水平離心機, 37°C水浴箱，熒光顯微鏡，共聚焦激光掃描顯微鏡，流式細胞計
方法：
1 懸浮細胞的染色：
(1)收獲正常和誘導凋亡的細胞(0.5~1′106)，PBS洗2次，1000rpm′10min。
(2)3%多聚甲醛冰浴10min，PBS洗2次，1000rpm′10min。
(3)加入PBS-T溶液，37°C孵育15min，PBS洗2次，1000rpm′10min。
(4)加入200ml胎牛血清，室溫反應30min。
(5)加入5ml FITC標記的TFAR19單抗(終濃度為1：40)，4°C反應30min
(6)熒光細胞洗液洗2次，1000rpm 10min。
人正常組織來源細胞結果觀察：將細胞沉淀滴片，熒光顯微鏡及共聚焦激光顯微鏡下觀察TFAR19在細胞中的定位。同時用流式細胞計定量檢測TFAR19蛋白的平均熒光強度。
(1) 貼壁生長的對數期細胞鋪在24孔或6孔板中(內有潔凈蓋玻片)，讓其爬片生長，待長到
50%~80%滿時，凋亡誘導劑處理細胞。
(2) 將不同時間點處理的細胞進行免疫熒光染色，染色步驟同上。
(3) 將染色的爬片細胞放于一張滴有少量甘油(5ml)的載玻片上，熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀察TFAR19在人正常組織來源細胞中的定位。