做貼壁細胞的實驗，經(jīng)常需要做細胞鋪板。這個實驗看似簡單，其實也不是那么好做的。關(guān)鍵是要鋪得均勻鋪得平整，要是中間密周圍稀，或者周圍密中間禿頂，那就露怯啦。
收集細胞要混勻
消化后的細胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細胞團充分地吹打開，最好是單個的狀態(tài)，但同時又不能損傷細胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團！然后懸浮離心后的細胞團時，先不要把所有液體都加進去！一般先加2mL液體，然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起，細胞要像云霧一樣散開，這樣易于形成單細胞。
接種細胞須小心
鋪6孔板，12孔板或24孔板，先在每個孔里面加1mL的培養(yǎng)基，晃動使之鋪勻整個孔底，然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入，這樣細胞懸液會平鋪在整個孔底，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這里又有一個竅門，放在顯微鏡的載物臺上面。因為顯微鏡的載物臺是水平校正過的，比什么桌面、超凈臺什么的要平多了。在載物臺上放置20-30分鐘，細胞不差這一會溫度和二氧化碳的，等細胞貼壁了，輕輕移入到孵箱中。
鋪96孔板，我每孔是加100微升細胞懸液，加完半邊板48孔后，將剩下的未加的細胞懸液再混一下，再繼續(xù)加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度，敲三次即可，太大力或次數(shù)太多會導致細胞集中成堆。也有人推薦輕微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈。
輕輕敲打勿抱團
細胞懸液加完后，將細胞培養(yǎng)板抬高，對著燈光，從底部往上看，看細胞有沒有抱團。如果有抱團的話，用手指從底部輕輕敲打，使之分散。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下，效果不錯。參數(shù)要設置成振幅小而頻率高哈。
十字交叉要水平
觀察和敲打后放入培養(yǎng)箱，然后畫“十字”，就是把細胞培養(yǎng)板貼著培養(yǎng)箱擱板，前后方向來回晃動10次，再左右方向晃動10次，正好是一個“十” 字形。然后就讓它靜靜地呆在培養(yǎng)箱擱板上，沒事不要去動它。這里要注意的是，托架應該裝在四根立柱相同高度的孔上，培養(yǎng)箱的擱板要水平校正，盡量地做到水平。擱板會向一個方向傾斜，對于貼壁時間長的細胞，就算當時混勻了，放進培養(yǎng)箱后也搖勻了，但是重力作用下細胞也會向一側(cè)聚集。 培養(yǎng)箱里面或者外面盡量不要放可以產(chǎn)生振動的儀器，比如蠕動泵、離心機、渦旋器一類的儀器。這些儀器產(chǎn)生的振動對細胞貼壁有影響，也可能會導致細胞貼壁不均勻。
細胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細胞在體外條件下的生長，在培養(yǎng)的過程中細胞不再形成組織(動物)。培養(yǎng)物是單個細胞或細胞群。細胞在培養(yǎng)時都要生活在人工環(huán)境中，由于環(huán)境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響，培養(yǎng)時間加長，傳代導致細胞出現(xiàn)單一化型。
9
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務