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2025/02/13
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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中支原體污染是較為麻煩的問(wèn)題，困擾著很多科研人。今天跟大家分享的是實(shí)驗(yàn)室支原體檢測(cè)方法。
培養(yǎng)法：使用支原體肉湯培養(yǎng)基接種待測(cè)樣品（細(xì)胞培養(yǎng)上清等），經(jīng)過(guò)約7-21天的培養(yǎng)，觀察有無(wú)支原體的生長(zhǎng)，以此來(lái)判斷細(xì)胞培養(yǎng)基中有無(wú)支原體存在。該方法雖然經(jīng)濟(jì)可靠，但實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)，所以常用來(lái)進(jìn)行對(duì)懷疑細(xì)胞的最后甄別。
熒光指示細(xì)胞法：該方法較為快捷，方法簡(jiǎn)單，但其靈敏度有一定的欠缺，易造成漏檢。
PCR法：PCR 法檢測(cè)支原體的方法最為快速、靈敏、取樣量少，既可做細(xì)胞本身，也可做細(xì)胞上清的檢測(cè)，同時(shí)可以檢測(cè)多種支原體的污染，是目前常用的檢測(cè)手段。但其成本較高，條件要求嚴(yán)格，且有時(shí)易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性。彌補(bǔ)的方法是對(duì)懷疑的樣品要經(jīng)過(guò)3 次PCR 檢測(cè)，或用培養(yǎng)法檢測(cè)。
DNA染色法：使用DNA染色試劑（如：Hoechst 33258）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，由于支原體中的核酸也可以被著色，所以，如果有支原體污染，會(huì)在細(xì)胞表面或者培養(yǎng)基中見(jiàn)到大小不等、不規(guī)則的熒光著色顆粒，與細(xì)胞核呈現(xiàn)的橢圓形、更大更亮熒光形成鮮明對(duì)比。
不同的實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)具體情況選擇不同的方法或幾種方法聯(lián)合使用以保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。
