PCR反应鉴定——PCR反应条件:

【产品名称】结核分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
【英文名称】Mycobacterium tuberculosis(MTB)
【产品编号】YSP6965
【包装规格】50T
【预期用途】
产品仅用于科研本产品可用于肉及肉制品中鸭源性成分的定性检测，所用仪器为实时荧光PCR仪，可通过实时扩增曲线判断样品中是否存在鸭源性成分。
【检验原理】
本试剂盒采用实时荧光PCR技术，针对鸭源性成分核酸序列设计特异性引物和荧光探针，通过实时荧光一步法RT-PCR（Taqman探针法）对鸭源性成分核酸进行定性检测。
*的扩增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及优化的反应体系保证更高的扩增效率。以相同量的293T细胞cDNA为模板，扩增β-actin基因，与同类产品相比，UNICONTM qPCR Master Mix扩增信号更强，扩增效率更高。
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PCR实验方法步骤：
结核分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
产品仅用于科研其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
实验步骤：
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
98%10g10g7,8二羟基升麻醇126330TenascinR

 趋化因子C-X3-C-基元配体1(CX3CL1)重组蛋白英文名称：Recombinant Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)

鞘脂脂质蛋白1(PLP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 CD3E & CD3G Heterodimer 蛋白*250(g)

GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) ELISA Kit  人抗小球基底膜抗体CAS号：110850 7氧基3异吩恶唑脱基酶检测试盒100gHuman/人Elisa试盒304695316

99%100g25g葫芦二醇60275Myoglobin

羊藿次苷I 质量规格：HPLC≥98%，标准品 Icariin I;  Icariside I

髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 LILRB1 / CD85 / ILT2 / ILR1 蛋白 (His 标签)*250(g)

人骨成型蛋白质2（BMP2）ANGPTL3/ANG5  血管生成素样蛋白3规格:96T/48TAlmotriptan Malate规格:15mgCD14分子检测试盒20mg人肝癌(HBV) ，Hep G2.2.15细胞1x10^6cells

96%100g25g维生素B2检测试剂盒(荧光光度法)SEMA6B

氨力农 质量规格：>98%,BR Amrinone 大鼠冠状动脉平滑肌细胞*培养基中山芽胞杆菌中山亚种 Sporolactobacillus nakayamae

MiddleBrook 7H11 Agar250羟色胺检测试盒5mg糜蛋白酶检测试盒trypsin

98%500g1g维生素B2检测试剂盒(荧光光度法)sphingosine 1phosphate receptor type 1

AZD9291 Mesylate 质量规格：>98%,EGFR抑制剂 AZD-9291 mesylate 人肝动脉平滑肌细胞*培养基NCI-H2452(人间皮瘤细胞)

Aeromonas Differential Agar250组织蛋白酶G检测试盒5mg胰蛋白酶检测试盒caseinalphas1

98%25g100g维生素B1检测试剂盒(荧光光度法)11β Hydroxysteroid dehydrogenase 1

磺钠(>98%，BR) 质量规格：>98%，BR Sodium benzenesulfonate 硫乙醇盐流体培养基(FT) 规格： 250g 用途： 用于培养需氧菌、微需氧菌和厌氧菌，还用于药品生物制品的无菌试验，及食品中产气荚膜羧菌的厌氧...

Arginine Broth acc. To Schubert250小异二聚体伴侣2检测试盒5mg酪蛋白αs1检测试盒Betacasein
结核分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒丹参素;Danshensu CAS号： 76822214 规格： 20mg 订购|咨询

靛蓝;Indigo CAS号： 482893 规格： 20mg 订购|咨询

α倒捻子素;αmangostin CAS号：  规格： 20mg 订购|咨询

大麦芽碱;Hordenine CAS号： 539151 规格： 20mg 订购|咨询

对香豆;4Hydroxycinnam CAS号： 501984 规格： 20mg 订购|咨询

冬凌草素;Oridonin CAS号： 28957042 规格： 20mg 订购|咨询

大叶茜草素;Rubimaillin CAS号： 55481884 规格： 20mg 订购|咨询

大黄素;Emodin CAS号： 518821 规格： 20mg 订购|咨询

胆维他;Anethole trithio CAS号： 532116 规格： 20mg 订购|咨询

达卡巴嗪;Dacarbazine CAS号：  规格： 20mg 订购|咨询

党参炔苷;Lobetyolin CAS号： 136085375 规格： 10mg 订购|咨询

靛玉红;Indirubin CAS号： 479414 规格： 20mg 订购|咨询

对氧醛;Anisic aldeh CAS号： 123115 规格： 20mg 订购|咨询

地榆皂苷Ⅱ;Ziyuglycoside CAS号： 35286590 规格： 20mg 订购|咨询

地榆皂苷Ⅰ;Ziyuglycoside CAS号： 35286589 规格： 20mg 订购|咨询