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當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>蛋白>>真核蛋白/EP>> 透明質(zhì)酸合酶1(HAS1)真核蛋白大鼠
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所 在 地上海市
更新時間:2025-04-08 18:39:01瀏覽次數(shù):278次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D3027 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Eukaryotic Hyaluronan Synthase 1 (HAS1) |
物種 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) |
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
透明質(zhì)酸合酶1(HAS1)真核蛋白大鼠 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) | GOY-01D3027 |
英文名稱:Eukaryotic Hyaluronan Synthase 1 (HAS1)
HuHAS1; HA synthase 1; Hyaluronate synthase 1; Hyaluronic acid synthase 1
型號:GOY-01D3027
酶與激酶
物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
來源:真核表達(dá)
宿主S. cerevisiae
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細(xì)胞定位:n/a
預(yù)測分子量:67.8kDa
實際分子量:-(差異分析請參閱說明書)
片段與標(biāo)簽:Met1~Val583 (Accession # Q8CH93) with N-terminal His Tag
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有0.01%SKL, 1mM DTT, 5%Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 97%
等電點:-
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格:10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
蛋白表達(dá)及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽(Tag)或切除純化標(biāo)簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達(dá)90%以上。
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操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1、在每1mL冷Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2、每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1mL冷Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3、取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5min;
4、取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5、分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1、貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2、懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中,1000轉(zhuǎn)/分離心10min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5min洗兩次;
3、在每1mL冷Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4、細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5mL~1mL |
5×106個 | 0.2mL~0.5mL |
5、置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6、14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7、分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
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