蛋白表达及纯化：

1.培养500ml哺乳动物细胞，然后将重组质粒转染到细胞中，通过瞬时表达产生目标蛋白。

2.收集含有目标蛋白的部分（细胞或培养上清）。

3.通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

交付内容：纯化好的目标蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达90%以上。

产品属性：

英文名称：Recombinant NAD Kinase (NADK)

Poly(P)/ATP NAD kinase

型号：GOY-01D918

酶与激酶

物种：Homo sapiens (Human，人)

来源：原核表达

宿主E.coli

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)

亚细胞定位：：n/a

预测分子量：55.8kDa

实际分子量：56kDa(差异分析请参阅说明书)

片段与标签：Leu187~His426 with N-terminal His and GST Tag

缓冲液成份：磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性状：冻干粉

纯度：> 90%

等电点：-

应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

规格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相关产品：

产品名称：肽基脱亚氨酶Ⅱ(PADI2)重组蛋白  物种：Homo sapiens (Human，人)  英文名称：Recombinant Peptidyl Arginine Deiminase Type II (PADI2)

产品名称：DNA指导聚合酶γ1(POLg1)重组蛋白  物种：Homo sapiens (Human，人)  英文名称：Recombinant Polymerase DNA Directed Gamma 1 (POLg1)

产品名称：过氧化还原酶6(PRDX6)重组蛋白  物种：Mus musculus (Mouse，小鼠)  英文名称：Recombinant Peroxiredoxin 6 (PRDX6)

产品名称：跨膜6(TMPRSS6)重组蛋白  物种：Homo sapiens (Human，人)  英文名称：Recombinant Transmembrane Protease, Serine 6 (TMPRSS6)

产品名称：S-期激酶关联蛋白1(SKP1)重组蛋白  物种：Homo sapiens (Human，人)  英文名称：Recombinant S-Phase Kinase Associated Protein 1 (SKP1)

操作步骤：

Ⅰ 实体组织蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

2．  每100mg固体组织置于培养皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；

3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；

4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取

1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；

2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃摇床平台上，温和振荡15 min；

6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

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配对盒基因8抗体 PAX8

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肿瘤抑制基因P53蛋白抗体（野生型P53） P53 protein(wt-p53)

肿瘤抑制基因p63α抗体 P51A

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SYBR Green I(10000×)100ul瓶

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