蛋白表达及纯化：

1.培养500ml哺乳动物细胞，然后将重组质粒转染到细胞中，通过瞬时表达产生目标蛋白。

2.收集含有目标蛋白的部分（细胞或培养上清）。

3.通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

交付内容：纯化好的目标蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达90%以上。

产品属性：

产品名称：丙酮酸激酶同工酶R/L(PKLR)重组蛋白大鼠

英文名称：Recombinant Pyruvate kinase isozymes R/L (PKLR)

PK; PyK; PK1; PKL; Pyruvate Kinase Isozymes R/L; Glutamic--pyruvic transaminase 1; R-type/L-type pyruvate kinase; Red cell/liver pyruvate kinase

型号：GOY-01D133

酶与激酶

代谢通路

物种：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

来源：原核表达

宿主E.coli

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)

亚细胞定位：：n/a

预测分子量：-

实际分子量：-(差异分析请参阅说明书)

片段与标签：N-terminal His Tag

缓冲液成份：磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性状：冻干粉

纯度：> 97%

等电点：-

应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

规格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相关产品：

英文名称：Recombinant Arachidonate Lipoxygenase 3 (ALOXE3)  产品名称：花生四烯酸脂加氧酶3(ALOXE3)重组蛋白物种：Homo sapiens (Human，人)

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英文名称：Recombinant Ribonuclease L (RNASEL)  产品名称：核糖核酸酶L(RNASEL)重组蛋白物种：Homo sapiens (Human，人)

操作步骤：

Ⅰ 实体组织蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

2．  每100mg固体组织置于培养皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；

3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；

4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取

1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；

2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃摇床平台上，温和振荡15 min；

6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

公司正在出售的产品：

细胞色素P450 17抗体 CYP17

碳酸酐酶9抗体 Carbonate dehydratase IX

细胞色素P450 7A1抗体/7a羟化酶 CYP7A1

24羟化酶抗体 CYP46

乳腺肿瘤新因子1抗体 CHRDL2

25α7羟化酶抗体 CYP7B1

细胞角蛋白3+12抗体 Cytokeratin 3+12

接头蛋白CrkL抗体 Crkl

细胞色素P450 2R1抗体 CYP2R1

铜代谢结构域蛋白10抗体 COMMD10

细胞色素P450 24A1抗体 CYP24A1

钙周期素结合蛋白抗体 CACYBP

丙酮酸激酶同工酶R/L(PKLR)重组蛋白大鼠小鼠小肠隐窝上皮细胞培养基光帽鳞伞 Pholiota nameko

NIH3T3全细胞裂解液大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

III型胶原酶(含100mL酶解缓冲液)ACHN(人肾细胞)

植物杆菌 Lactobacillus plantarum粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

柱孢绿僵菌 Metarhizium eylindrosporae

人主动脉平滑肌细胞培养基100mL

小鼠膀胱平滑肌细胞培养基100mL

人大细胞肺细胞苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

801-D (人巨细胞性肺细胞)恒河猴肾细胞

酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactisA549/DDP, 人肺腺耐药细胞株

异常毕赤酵母 Pichia anomala铜绿假单胞菌 Pseudomnas aeruginose

香菇 Lentinula edodes

MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨细胞前体细胞)5×106cells/瓶×2