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小鼠黑色素瘤细胞;B16-F1图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 小鼠黑色素瘤细胞;B16-F1图片
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 B16-F1是B16-F0的亚系。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C27
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR STR鉴定
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
α-Piperidinobutiophenone (hydrochloride) (5 mg)1-phenyl-2-(1-piperidinyl)-1-butanone, monohydrochloride; α-Piperidinobutiophenone (hydrochloride)
Rasagiline (100 mg)(1R)-2,3-dihydro-N-2-propyn-1-yl-1H-inden-1-amine; Azilect ; Rasagiline
4-hydroxy Hexenal (10 mg)(±)-4-hydroxy-2E-hexenal; 4-HHE; 4-hydroxy Hexenal
MK 0524 (1 mg)Laropiprant; (3R)
Prostaglandin Screening Library II (96-Well) (50 ul)Prostaglandin Compound Screening Library 2
(±)-epi CP 47,497 (solution) (5 mg)rel-2[(1S,3S)-3-hydroxycyclohexyl)]-5-(2-methyloctan-2-yl)phenol; 3-trans CP 47,497; (±)-epi CP 47,497 (solution)
(±)17-HDoHE (25 ug)(±)17-hydroxy-4Z,7Z,10Z,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid; 17-hydroxy Docosahexaenoic Acid; (±)17-HDoHE
(±)5,6-DHET lactone (25 ug)(±)5,6-dihydroxy-8Z,11Z,14Z-eicosatrienoic acid, 1,5-lactone; (±)5,6-DiHETrE lactone; (±)5,6-DHET lactone
Ketamine (hydrochloride) (10 mg)CI-581; 2-
(+)-Methamphetamine (hydrochloride) (50 mg)(+)-Methylamphetamine|NSC 169505|d-Desoxyephedrine|d-Methamphetamine; N,
2C-TFM (hydrochloride) (5 mg)2C-CF3; 2,5-dimethoxy-4-(trifluoromethyl)-benzeneethanamine, monohydrochloride
3-oxo Stearic Acid (100 ug)3-oxo Octadecanoic Acid|β-keto Stearic Acid; 3-oxo-octadecanoic acid
Zinquin ethyl ester (1 mg)2-[[2-methyl-8-[[(4-methylphenyl)sulfonyl]amino]-6-quinolinyl]oxy]-acetic acid, ethyl ester
AB-FUBINACA-d4 (1 mg)N-[(1S)-1-(aminocarbonyl)-2-methylpropyl]-1-[(4-fluorophenyl)methyl]-4,5,6,7-d4-1H-indazole-3-carboxamide
JIB-04 (10 mg)JHDM Inhibitor VII|NSC 693627; (E,E)-2-(5-chloro-2-pyridinyl)hydrazone phenyl-2-pyridinyl-methanone
Heat Shock Protein Inhibitor I (25 mg)HSP Inhibitor I|KNK 437; 3-(1,3-benzodioxol-5-ylmethylene)-2-oxo-1-pyrrolidinecarboxaldehyde
Lamotrigine (10 mg)BW 430C|Epilepax|LTG|Lamictal; 6-Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL
CAS59-92-73-(3,4- 二羟基苯 )-L- 丙氨酸5g
12-255SURE 菌种1mL
一步法无内毒素质粒 DNAout50 次
姬姆色素染料1g
固蓝 BB 盐5g
辣根过氧化物酶,偶联100mg
CAS133-32-4吲哚 -3- 丁酸1g
131006-100RIPA 裂解液 ( 强 )100mL
荧光素标记的生物素5mg
聚乙烯亚胺100mL
双 (2- 羟乙基 ) 亚氨基三 ( 羟甲基 ) 甲烷5g
UTP 溶液,2.5mM2mL
CAS9003-99-0辣根过氧化物酶10mg
131078-5天然蛋白 A1mg
柱式 DNA PAGE 胶回收试剂盒50 次
L-NAME(eNOS 抑制剂 )200mg
苹果酸脱氢酶5ku
MTS 细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒500 次
CAS64285-73-03,3’,5,5’- 四甲基联苯胺二盐酸1g
130880-1脂蛋白 PAGE 染液1套
β- 氨基1g
M13mp18DNA10μg
吡啰红 G5g
乳酸测试盒 ( 测全血 )48 T
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