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轉化細胞常用純化方法

時間:2017-9-8閱讀:102
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  轉化細胞人工純化是利用人為手段造成對某一細胞生長有利的環(huán)境條件,抑制其他細胞的生長從而達到純化細胞的目的。
1、細胞時間差酶消化法:
酶消化法是比較常用的純化方法,不僅對貼壁細胞可行,能利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同,是兩者分開,達到純化的目的;另外對貼壁細胞與半貼壁細胞及黏附細胞間的分離純化也是十分有效的。
兩者在胰蛋白酶的作用下,由于成纖維細胞先脫壁,而上皮細胞要消化相當長的時間才脫壁,特別是在原代細胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯,故可采用多次差別消化方法將上皮細胞和成纖維細胞分開,方法步驟如下:
采用常規(guī)消化傳代方式將0.25%胰蛋白酶注入培養(yǎng)瓶內兩次,每次加1ml(25ml培養(yǎng)瓶),來回輕搖1-2次,使胰蛋白酶流過所有細胞表面,然后倒掉。
蓋好瓶塞,將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)成纖維細胞變園,部分脫落,立即加入2ml有血清的培養(yǎng)基終止消化。
用彎頭吸管輕輕吹打成纖維細胞生長區(qū)域(可事先在鏡下用記號筆在培養(yǎng)瓶上劃出記號)。吹打時不要用力,也不要吹打上皮細胞生長區(qū)域。吹打結束后,再用少量培養(yǎng)基漂洗一遍,然后加入適量培養(yǎng)基于瓶內繼續(xù)培養(yǎng),也可重復上述操作再進行一次。
隔幾日后或下次傳代時,再進行上述操作,進過幾次處理,就可將成纖維細胞去除或者將兩者分開。
2、細胞培養(yǎng)機械刮除法:
原代培養(yǎng)時,如果上皮轉化細胞和成纖維細胞分為區(qū)成混雜生長,每種細胞都以小片或區(qū)域性分布的方式生長在瓶壁上??刹捎脵C械的方法去除不需要的細胞區(qū)域而保留需要的細胞區(qū)域,其方法步驟如下 :
將要純化細胞的培養(yǎng)瓶,在凈化室內放在倒置顯微鏡監(jiān)視下進行操作。
用硅橡膠刮子在不需要生長的細胞區(qū)域推劃,使細胞懸浮在培養(yǎng)基中,注意不要傷及所需細胞。
推劃后用培養(yǎng)基沖洗振搖兩次倒掉,即可將培養(yǎng)基加入原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
數(shù)日后如發(fā)現(xiàn)不需要的細胞又長出,可再進行上述操作,這樣反復多次可以純化細胞。操作過程中要嚴格無菌操作,防止污染。
≥98%    規(guī)格:        *:    Curcumol    莪術醇    
≥98%    規(guī)格:        *:    (+)-Catechin    兒茶素    
≥96%    規(guī)格:        *:    Dihydrotanshinone I    二氫丹參酮 I    
≥95%    規(guī)格:        *:    Dihydrocapsaicin    二氫辣椒堿    
≥99%    規(guī)格:        *:    Dihidromethysticin    二氫麻醉椒苦素    
≥97%    規(guī)格:        *:    Columbianadin    二氫歐山芹醇當歸酸酯    
≥98%    規(guī)格:        *:    Dihydrolycorine    二氫石蒜堿  
轉化細胞 

 

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