*，干细胞mTeSR™1是文献发表的hPSC培养基，cGMP级别且无需饲养层，引用文献超过1500篇，被广泛用于各种前沿的hPSC研究中，包括基因编辑和3D悬浮培养等。在接下来的几期推送中，我们将推出hPSC维持培养专题，详细介绍多能干细胞的维持培养、传代、冻存和解冻等。
细胞在mTeSR™1培养的形态

未分化的人ES细胞和iPS细胞在mTeSR™1中培养，形成紧密的多细胞集落，具有清晰的边界。细胞间紧密的堆积起来，具有高核质比，且核仁显著。健康的集落会无缝的融合起来，在中心有多层细胞，在相衬显微镜下观察， 成紧密的细胞簇。mTeSR™1中培养的集落在Vitronectin XF™上生长时更紧密且更圆，而使用Corning® Matrigel®生长的集落则较为分散且形状不规则。 在这两种基质上，自发性分化的特征表现为失去集落边界的完整性，一个集落内有不规则的细胞形态区域，或者出现其他的细胞类型等。

使用mTeSR™1进行培养时如何确定传代时间

在mTeSR™1中培养的人ES和iPS细胞，当大多数集落长得大，紧密，集落的中心比边缘更致密的时候，就可以传代了。使用其他培养基时集落形态会有所不同。在mTeSR™1中铺板第4天，集落可能还没有显示非常致密的细胞堆积，但四天后，集落的密度和大小会迅速增加，同时在传代之前的1-2天，集落的形态也会发生显著的变化。

如果将集落传代的太早或者太频繁，在铺板的时候，细胞聚集体也许会变得不贴壁，导致产率降低，而且细胞也可能会开始分化（出现其他的细胞种类和不同的形态）。如果传代时间太晚，培养物可能会开始出现分化的迹象。大概会有24 - 48小时的*传代时间窗口。如果出现较大的集落，并具有有致密的中心，需要在24小时内传代。

3. 试剂和材料的准备

3.1 配制mTeSR™1*培养基

使用无菌操作制备mTeSR™1的*培养基（基础培养基 + 5X 添加物）。下面的示例是配置500 mL的*培养基。如需准备其他体积，请按照比例调整。
注意：在室温（15 - 25°C）融解添加物和*培养基，或者2 - 8°C过夜融解。不可使用37°C 水浴解冻。

（1） 将mTeSR™1 5X 解冻添加剂并*混匀。
注意：一旦解冻，立即使用或者分装并储存于 -20°C，于 -20°C可存贮3个月。不要超过添加剂的有效期。分装的添加剂融解后，立即使用。不可再次冷冻。

（2） 将100 mL 的mTeSR™1 5X添加剂加入到400 mL的mTeSR™1基础培养基中，*混匀。
注意：如果不立即使用，mTeSR™1*培养基可以在2 - 8°C存储2周。或者分装并储存于 -20°C可达6个月。不可超过每个单独组分的有效期。分装的*培养基融解后，立即使用或者在2-8°C保存可达2周。不要重新冷冻。
如果干细胞是无菌制备，mTeSR™1*培养基可以立刻使用。如果需要，也可以用0.2 μm低蛋白滤器过滤。
1-acetoxy-5-deacetyl-baccatin I    ≥98%
2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside    ≥98%
20(22)-ene-PPD    ≥97%
20(S)-Ginsenoside C-K    ≥98%        
20(S)-Protopanaxadiol saponins    ≥98%        
Anemosapogenin    ≥98%        
25-OH-Protopanaxdiol    ≥97%
25-OH-Protopanaxtiol    ≥97%
2-O-galloylhyperin    ≥98%        
2-Hydroxyeupatolide    ≥97%        
3’-methoxy-5’-hydroxyisoflavone-7-O-β-D-glucoside    95%
4-Hydroxyisoleucine    ≥98% ≥97%
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