細(xì)胞凍存講究“慢凍”。動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5～10% 二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO) 和90～95%原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基均勻混合。由于DMSO稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能，不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中，在使用前先行配制完成。用于細(xì)胞凍存的大部份添加物和試劑要冷藏，常用液體細(xì)胞培養(yǎng)基用于凍存時(shí)，zui多可以凍融3次，如果次數(shù)過(guò)多會(huì)將使含有的蛋白質(zhì)發(fā)生降解和沉淀，這將會(huì)影響培養(yǎng)基的性能。
體外培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性，即當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候，它就會(huì)停止生長(zhǎng)，及時(shí)傳代后，細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。一般采用胰蛋白酶消化的方式進(jìn)行傳代。胰蛋白酶溶液的消化能力與溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca2+,Mg2+離子和血清等因素有關(guān)，通常情況下胰蛋白酶在pH8.0、溫度37℃時(shí)作用能力zui強(qiáng)，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力，每次進(jìn)行傳代消化前，先用不含鈣、鎂離子的緩沖液沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶，去除殘留的含血清的培養(yǎng)液，能明顯提高消化液的消化能力。多數(shù)細(xì)胞傳代消化使用的消化液為PBS溶液中添加0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA，EDTA主要是用來(lái)螯合能夠抑制蛋白酶活性的游離的鎂離子和鈣離子，以保持胰蛋白酶的活性。
通常細(xì)胞消化的時(shí)間越短越好，但是不同的細(xì)胞，其貼壁性有一定的差異，對(duì)于易消化的細(xì)胞控制其消化程度，對(duì)于貼壁性較強(qiáng)的細(xì)胞，在消化時(shí)可將消化液事先在37℃條件下進(jìn)行預(yù)熱，消化時(shí)盡量控制在37℃條件下進(jìn)行，可加快消化的時(shí)間及降低對(duì)細(xì)胞的損傷。值得注意的是，胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過(guò)30分鐘，就會(huì)變得不穩(wěn)定。