比較難消化的細(xì)胞（潤(rùn)洗方法5min還不能消化），就以coloncancer為例，比如HCT15,LS411和KM12，這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mm dish，一次zui多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過5min，即可見細(xì)胞成片移動(dòng)，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候，比如tsDC細(xì)胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。

5，常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（增殖，凋亡，遷移，分化之類的），受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤(rùn)洗的方法消化（難消化細(xì)胞例外）即可。但少數(shù)實(shí)驗(yàn)，比如病毒包裝，對(duì)細(xì)胞代數(shù)，對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求*。這個(gè)時(shí)候，胰酶消化，就是潤(rùn)洗，都會(huì)對(duì)細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會(huì)逐漸下降（當(dāng)然也有其它因素影響包裝效率）。這個(gè)時(shí)候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關(guān)酶的活性，來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。