1、细菌、真菌污染的检测

　　(1)肉眼观察

　　细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到，例如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。

　　(2)接种观察

　　采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。

　　(3)镜下观察

　　在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。

　　若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。

　　2、支原体污染的检测

　　(1)相差显微镜观察

　　直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。

　　(2)荧光染色法观察

　　用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。

　　(3)电镜检测

　　若条件许可，可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48～72小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。

支原体扫描电镜图片

　　(4)培养检测

　　将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基，培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀，然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。

　　3 、病毒的检测

　　1) 应用电镜技术快速诊断动物病毒病

冠状病毒电镜图

　　2) 逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒