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食品中赭曲霉毒素A的测定
由赭曲霉(Aspergiltus Ochratoxin)和硫色曲霉(A.sulphureus)等产生的赭曲霉毒素(Ochratoxin)有A、B、C、D 四种化合物。其中，赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）是重具卫生学意义的霉菌代谢产物。赭曲霉毒素A 是一种强致死性化合物，它会导致肝、肾坏死性病变。对雏鸭经口测试， LD50 仅为0.5mg/kg体重，其毒性与黄曲霉素相当。在肝癌高发区的谷物中可分离出赭曲霉素。赭曲霉素A 的污染范围较广，几乎可污染玉米，小麦等所有的谷物和中药材。
目前已有粮食和食品中赭曲霉毒素A 的检验标准。本文以薏苡仁、淡豆豉和白扁豆为基质，发展赭曲霉毒素A 的前处理和分离检测方法，以期对同类型的检测提供参考。
样品前处理
提取液
甲醇：水 (8:2, v:v)。
PBS 溶液
称取8 g 氯化钠、1.2 g 磷酸氢二钠、0.2 g 磷酸二氢钾，溶解于990 mL 水中，用浓盐酸调节pH 7，用水稀释至1 L。
清洗液缓冲
称取25 g 氯化钠、5 g 碳酸氢钠溶于水中，加入0.1 mL 吐温-20，用水稀释至1 L。称取15 g 中药样品加入到50 mL 离心管中，加入30 mL 提取液，加入0.75 g氯化钠，振摇后涡旋3 min，超声20 min，中间振摇3 次，11000 r/min 离心15 min后取上清液。取2 mL 上清液, 氮吹除去大部分的甲醇后，用PBS 溶液定容到10mL，过0.22 um 滤膜。取过滤后的提取液5 mL，以1 滴每3 秒流速流过免疫亲和柱，然后2~4 mL 空气排空，10 mL 清洗缓冲液、10 mL 水依次淋洗免疫亲和柱，弃去淋洗液，抽干小柱。1.5 mL 甲醇洗脱，40 ℃下氮气吹干，用流动相定容至1 mL，供检测。
测试用对照品的配制
使用流动相将10 mg/L 的赭曲霉毒素A 标准溶液依次稀释成3.13 μg/L、6.25μg/L、12.50 μg/L、25.00 μg/L、50.00 μg/L、100.00 μg/L 和200.00 μg/L 的线性标准溶液。
色谱条件
色谱柱（货号）:Acclaim C18
4.6×150 mm,5 μm(货号：059148)
流动相：乙腈：水：冰醋酸 (48:51:1, v:v:v)
流速：1mL/min
检测器：荧光，Ex: 333nm；Em: 460nm
柱温：30℃
进样量：20μL
仪器：Ultimate 3000
实验谱图
1
线性
图1 线性叠加谱图（从低到高依次代表浓度为3.13 μg/L、6.25 μg/L、12.50 μg/L、25.00 μg/L、50.00μg/L、100.00 μg/L 和200.00 μg/L 的OTA 标准溶液）
图2 OTA 标准曲线图
表1 赭曲霉毒素A 线性曲线
名称 线性曲线
OTA A = 6166C + 12898，R² = 1.000
2
重复性
图3 低浓度样品(3.13 μg/L OTA)重复性
表2 低浓度样品进样重复性
名称 保留时间 RSD% 峰面积 RSD% 样品浓度（μg/L）
OTA 0.09% 0.67 % 3.13
图4 高浓度样品(200 μg/L OTA)重复性
表3 高浓度样品进样重复性
名称 保留时间 RSD% 峰面积 RSD% 样品浓度（μg/L）
OTA 0.01% 0.11% 200
实验数据
检出限和定量限
图5 检出限 (0.15 μg/L OTA)谱图与空白叠加谱图
图6 定量限 (0.55 μg/L OTA)谱图与空白叠加谱图
表4 赭曲霉毒素A 的LOD 和LOQ
名称 保留时间（min）
LOD(S/N=3)
(μg/L)
LOQ(S/N=10)
(μg/L)
OTA 9.05 0.15 0.55
回收率
图7 薏苡仁加标回收
1- 薏苡仁样品加标； 2-赭曲霉毒素A 对照品； 3-薏苡仁样品
图8 淡豆豉加标回收
1-淡豆豉样品加标； 2-赭曲霉毒素A 对照品； 3 淡豆豉样品
图9 白扁豆加标回收
1-白扁豆样品加标； 2-赭曲霉毒素A 对照品； 3-白扁豆样品
表5 回收率数据
名称 加标量（μg/L） 加标回收率（%）
薏苡米 2.5 99.8
淡豆豉 2.5 100.2
白扁豆 2.5 97.4
结论
本文参考《SNT 1940-2007 进出口食品中赭曲霉毒素A 的测定方法》、《SNT1746-2006 进出口大豆、油菜籽和食用植物油中赭曲霉毒素A 的检验方法》和《方法报告-2013-APP-RLC-058-免疫亲和液相荧光法测定饲料中的赭曲霉毒素A》发展赭曲霉毒素A 测定的方法。以赭曲霉毒素A 对照品为样品，考察了液相方法的检测限、检出限和线性范围。以薏苡仁、白扁豆和淡豆豉为基质，考察了前处理方法的净化能力和基质干扰情况。结果表明，该前处理方法回收率高、具有较好的净化能力，赭曲霉毒素A 出峰位置附近无干扰峰，可用于薏苡仁、白扁豆和淡豆豉赭曲霉毒素A 的检测。液相方法重复性好、具有较宽的线性范围、较低的检测限和检出限。