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離子色譜儀可以檢測(cè)糖嗎?
離子色譜儀的原理是通過(guò)輸液泵將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速(或壓力)輸送到分析系統(tǒng)。在色譜柱之前，樣品將被引入樣品注射器。流動(dòng)相將樣品帶入色譜柱，分離柱中的成分，然后與流動(dòng)相一起依次流向檢測(cè)器。在抑制性離子色譜中，在電導(dǎo)檢測(cè)器前增加一個(gè)抑制系統(tǒng)，即使用另一個(gè)高壓注射泵將再生液輸送到抑制器。在抑制器中，降低流動(dòng)相的背景電導(dǎo)率，然后將流出物引入電導(dǎo)率檢測(cè)單元，并將檢測(cè)到的信號(hào)發(fā)送到數(shù)據(jù)系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理或保存。
離子色譜是一種高效液相色譜，也稱(chēng)為高效離子色譜或現(xiàn)代離子色譜。與傳統(tǒng)的離子交換柱色譜不同，該樹(shù)脂交聯(lián)度高、交換容量低、進(jìn)樣量小。當(dāng)用柱塞泵輸送洗脫液時(shí)，通常要對(duì)洗脫液進(jìn)行在線(xiàn)自動(dòng)連續(xù)電導(dǎo)率檢測(cè)。
從水中常見(jiàn)糖類(lèi)的pKa值可以看出，常見(jiàn)的單糖、二糖和糖醇的pKa值一般在L2-14之間，常見(jiàn)的糖醛酸和糖胺的pKa值小于7。當(dāng)堿性溶液的酸堿度大于或等于L2時(shí)，大多數(shù)糖基化以陰離子的形式存在，因此陰離子交換色譜柱可作為洗脫液分離強(qiáng)堿性溶液。
由于糖分子結(jié)構(gòu)的疏水部分，糖的分離機(jī)理不僅是陰離子交換，還有疏水吸附。碳水化合物在陰離子交換柱上的保留容量主要取決于其電荷數(shù)、分子大小、組成和結(jié)構(gòu)。
安培檢測(cè)是一種檢測(cè)技術(shù)，它測(cè)量電化學(xué)活性物質(zhì)在適當(dāng)?shù)耐饧与娢幌掳l(fā)生氧化或還原反應(yīng)時(shí)電流的變化。糖的分離是在堿性條件下進(jìn)行的，而金電極的檢測(cè)條件通常是堿性的。金電極表面可以為糖的電化學(xué)氧化提供反應(yīng)環(huán)境。因此，金電極檢測(cè)與陰離子交換分離有很好的匹配。由于糖的氧化產(chǎn)物會(huì)覆蓋電極表面，造成不可逆的污染，因此需要選擇不同的外加電位對(duì)電極表面進(jìn)行清洗和活化，使電極能夠連續(xù)工作，即脈沖安培檢測(cè)。