色譜分離柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團(tuán)，這些帶電基團(tuán)通過(guò)靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動(dòng)相中存在其他帶相反電荷的離子，按照質(zhì)量作用定律，這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進(jìn)行交換。

 

　　色譜分離柱是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法，其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結(jié)合，這種帶電分子與固定相之間的結(jié)合作用是可逆的，在改變pH或者用逐漸增加離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫時(shí)，離子交換劑上結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同，其與離子交換劑的結(jié)合能力也不同，所以被洗脫到溶液中的順序也不同，從而被分離出來(lái)。

 

　　色譜分離柱的再生方法有兩種：

 

　?。?）先用25ml蒸餾水通過(guò)柱子以除去緩沖鹽類，再用25ml甲醇沖洗，以除去由于分配效應(yīng)而殘存在骨架中的雜質(zhì)，再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類，后用緩沖液平衡。

 

　　（2）先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌，然后用水洗滌（不要用堿性溶液，以防硅膠基質(zhì)溶解），后用緩沖液平衡。