在反相色譜中，流動相的選擇原則是：
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非極性/中性化合物分析一般用有機溶劑和水。極性（特別是離子型）化合物分析時，通常需要在水中加入酸/堿或者緩沖鹽來調(diào)整流動相pH值以獲得對稱的峰形和合理的保留時間。
向流動相中加入改性劑主要有以下兩種方式：
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01 氫離子抑制法
● 對于弱酸（3≤pka≤7）/弱堿（7≤pka≤8）組分，一般通過調(diào)節(jié)流動相的pH來抑制目標(biāo)化合物的解離，以達到分離目的。弱酸的反相色譜保留值隨流動相pH值的減小而增大，當(dāng)pH值遠(yuǎn)小于弱酸的pka值（pH＜pka-2）時，弱酸99%以上以分子形式存在，有利于在反相色譜柱上保留。
● 對于弱堿，情況相反（須pH＞pka+2）。因此分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量酸性緩沖液，如三氟yi酸等（實例見圖1）；分析弱堿樣品時，則加入少量堿性緩沖液，如三乙胺等。
● 下表列出幾種常見緩沖鹽的pH值可用范圍。一般緩沖鹽濃度在5-50mmol/L范圍就夠用，濃度高的緩沖鹽（＞50mmol/L）雖然緩沖能力增強，但可能在與高比例有機相混合時析出，對液相色譜輸液泵等產(chǎn)生不利影響。
1-草酸；2-酒石酸；3-奎寧酸；4-甲酸；
5-丙酮酸；6-蘋果酸；7-抗壞血酸；8-乳酸；
9-乙酸；10-馬來酸；11-檸檬酸；12-富馬酸；
13-順烏頭酸；14-丙烯酸；15-丙酸；16-檸康酸
02 離子對色譜法
● 對于強酸/堿及其他離子型化合物，需要在水中加入相應(yīng)的“對/反離子"，使其與待測組分離子結(jié)合生成弱極性的離子對化合物（中性締合物），以增加其在反相色譜柱（如C18、C8）上的保留，從而改善分離效果。
● 離子對試劑一般可分為酸性和堿性兩大類：
1）分析堿性物質(zhì)常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽（實例見圖2），如己烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉等。
2）分離多羧基、磺酸基等酸性物質(zhì)常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基氯化銨等。被測組分保留時間與離子對性質(zhì)、濃度、流動相組成及其pH值等都有關(guān)。
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