在方法開發(fā)工作中，經(jīng)常會(huì)碰到驗(yàn)證時(shí)方法無(wú)法重現(xiàn)的情況，而這種時(shí)候，很多人會(huì)把這個(gè)“錯(cuò)"歸到色譜柱上。確實(shí)，有極少數(shù)的“超敏體質(zhì)"項(xiàng)目，會(huì)對(duì)色譜柱的內(nèi)環(huán)境極度敏感導(dǎo)致無(wú)法重現(xiàn)。但大部分無(wú)法重現(xiàn)卻是其他原因造成的，今天，我們就來(lái)說(shuō)一說(shuō)這些其他原因。
使用期間的色譜柱變化，俗稱色譜柱改性
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這種問(wèn)題經(jīng)常出現(xiàn)在使用檢測(cè)過(guò)其他項(xiàng)目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā)，再換色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)時(shí)發(fā)生。這種情況是因?yàn)?，有些特殊物質(zhì)（可能是樣品中的微量雜質(zhì)或強(qiáng)保留物質(zhì)）會(huì)吸附在填料上無(wú)法洗脫下來(lái)，這種情況就會(huì)對(duì)色譜柱造成改性。在檢某些特定成分時(shí)，會(huì)影響成份的保留能力，導(dǎo)致更換色譜柱后無(wú)法重現(xiàn)分離效果。避免這種情況zuihao的辦法就是方法確定后馬上用新色譜柱進(jìn)行結(jié)果重現(xiàn)。如新柱無(wú)法重現(xiàn)結(jié)果，就有很大的可能是舊柱子被改性引起的。
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有時(shí)，使用沒(méi)有測(cè)過(guò)其他項(xiàng)目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā)，后面重現(xiàn)的時(shí)候，也會(huì)發(fā)生更換柱子無(wú)法重現(xiàn)的情況。這是因?yàn)?，方法開發(fā)過(guò)程中會(huì)使用到很多的不同條件及不同前處理方法處理的樣品，這種情況，也可能使色譜柱改性。因此，哪怕是用沒(méi)做過(guò)其他項(xiàng)目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā)的，方法確定后，也需用全新的色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)。
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色譜柱使用極限條件（如高pH值，高溫，低pH值等），導(dǎo)致色譜柱受損，在這種色譜柱上開發(fā)的方法，在更換新柱時(shí)，也經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)無(wú)法重現(xiàn)的情況。高pH值會(huì)引起硅膠溶解，色譜柱塌陷；低pH值會(huì)導(dǎo)致鍵合相容易脫落，高溫會(huì)導(dǎo)致填料塌陷，板結(jié)等情況，使色譜柱的保留能力發(fā)生變化。因此，使用這種條件的方法，方法確定后，一定要用新的色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)。
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色譜柱使用過(guò)含離子對(duì)試劑的條件，離子對(duì)試劑會(huì)使色譜柱改性，無(wú)法*沖洗干凈，因此，使用過(guò)離子對(duì)試劑的色譜柱建議專柱專用。
具體的原因，我們將在下篇繼續(xù)為您解答！未完待續(xù)~
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