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What?又是方法重現(xiàn)性!(上篇)

閱讀:1339      發(fā)布時(shí)間:2022-3-28
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在方法開發(fā)工作中,經(jīng)常會(huì)碰到驗(yàn)證時(shí)方法無(wú)法重現(xiàn)的情況,而這種時(shí)候,很多人會(huì)把這個(gè)“錯(cuò)"歸到色譜柱上。確實(shí),有極少數(shù)的“超敏體質(zhì)"項(xiàng)目,會(huì)對(duì)色譜柱的內(nèi)環(huán)境極度敏感導(dǎo)致無(wú)法重現(xiàn)。但大部分無(wú)法重現(xiàn)卻是其他原因造成的,今天,我們就來(lái)說(shuō)一說(shuō)這些其他原因。

使用期間的色譜柱變化,俗稱色譜柱改性


1

這種問(wèn)題經(jīng)常出現(xiàn)在使用檢測(cè)過(guò)其他項(xiàng)目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā),再換色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)時(shí)發(fā)生。這種情況是因?yàn)?,有些特殊物質(zhì)(可能是樣品中的微量雜質(zhì)或強(qiáng)保留物質(zhì))會(huì)吸附在填料上無(wú)法洗脫下來(lái),這種情況就會(huì)對(duì)色譜柱造成改性。在檢某些特定成分時(shí),會(huì)影響成份的保留能力,導(dǎo)致更換色譜柱后無(wú)法重現(xiàn)分離效果。避免這種情況zuihao的辦法就是方法確定后馬上用新色譜柱進(jìn)行結(jié)果重現(xiàn)。如新柱無(wú)法重現(xiàn)結(jié)果,就有很大的可能是舊柱子被改性引起的。

2

有時(shí),使用沒(méi)有測(cè)過(guò)其他項(xiàng)目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā),后面重現(xiàn)的時(shí)候,也會(huì)發(fā)生更換柱子無(wú)法重現(xiàn)的情況。這是因?yàn)?,方法開發(fā)過(guò)程中會(huì)使用到很多的不同條件及不同前處理方法處理的樣品,這種情況,也可能使色譜柱改性。因此,哪怕是用沒(méi)做過(guò)其他項(xiàng)目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā)的,方法確定后,也需用全新的色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)。

3

色譜柱使用極限條件(如高pH值,高溫,低pH值等),導(dǎo)致色譜柱受損,在這種色譜柱上開發(fā)的方法,在更換新柱時(shí),也經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)無(wú)法重現(xiàn)的情況。高pH值會(huì)引起硅膠溶解,色譜柱塌陷;低pH值會(huì)導(dǎo)致鍵合相容易脫落,高溫會(huì)導(dǎo)致填料塌陷,板結(jié)等情況,使色譜柱的保留能力發(fā)生變化。因此,使用這種條件的方法,方法確定后,一定要用新的色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)。

4

色譜柱使用過(guò)含離子對(duì)試劑的條件,離子對(duì)試劑會(huì)使色譜柱改性,無(wú)法*沖洗干凈,因此,使用過(guò)離子對(duì)試劑的色譜柱建議專柱專用。

具體的原因,我們將在下篇繼續(xù)為您解答!未完待續(xù)~



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