在方法開發(fā)工作中，經(jīng)常會碰到驗證時方法無法重現(xiàn)的情況，而這種時候，很多人會把這個“錯"歸到色譜柱上。確實，有極少數(shù)的“超敏體質(zhì)"項目，會對色譜柱的內(nèi)環(huán)境極度敏感導(dǎo)致無法重現(xiàn)。但大部分無法重現(xiàn)卻是其他原因造成的，今天，我們就來說一說這些其他原因。
使用期間的色譜柱變化，俗稱色譜柱改性
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這種問題經(jīng)常出現(xiàn)在使用檢測過其他項目的色譜柱進行方法開發(fā)，再換色譜柱進行重現(xiàn)時發(fā)生。這種情況是因為，有些特殊物質(zhì)（可能是樣品中的微量雜質(zhì)或強保留物質(zhì)）會吸附在填料上無法洗脫下來，這種情況就會對色譜柱造成改性。在檢某些特定成分時，會影響成份的保留能力，導(dǎo)致更換色譜柱后無法重現(xiàn)分離效果。避免這種情況zuihao的辦法就是方法確定后馬上用新色譜柱進行結(jié)果重現(xiàn)。如新柱無法重現(xiàn)結(jié)果，就有很大的可能是舊柱子被改性引起的。
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有時，使用沒有測過其他項目的色譜柱進行方法開發(fā)，后面重現(xiàn)的時候，也會發(fā)生更換柱子無法重現(xiàn)的情況。這是因為，方法開發(fā)過程中會使用到很多的不同條件及不同前處理方法處理的樣品，這種情況，也可能使色譜柱改性。因此，哪怕是用沒做過其他項目的色譜柱進行方法開發(fā)的，方法確定后，也需用全新的色譜柱進行重現(xiàn)。
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色譜柱使用極限條件（如高pH值，高溫，低pH值等），導(dǎo)致色譜柱受損，在這種色譜柱上開發(fā)的方法，在更換新柱時，也經(jīng)常會出現(xiàn)無法重現(xiàn)的情況。高pH值會引起硅膠溶解，色譜柱塌陷；低pH值會導(dǎo)致鍵合相容易脫落，高溫會導(dǎo)致填料塌陷，板結(jié)等情況，使色譜柱的保留能力發(fā)生變化。因此，使用這種條件的方法，方法確定后，一定要用新的色譜柱進行重現(xiàn)。
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色譜柱使用過含離子對試劑的條件，離子對試劑會使色譜柱改性，無法*沖洗干凈，因此，使用過離子對試劑的色譜柱建議專柱專用。
具體的原因，我們將在下篇繼續(xù)為您解答！未完待續(xù)~
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