什么是磷酸化蛋白質(zhì)
蛋白質(zhì)磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團（P04）轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上（主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y），從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過程。該修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTM）中為重要的形式，具有顯著的生物學(xué)功能，細胞增殖和凋亡，良性發(fā)育，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，新陳代謝，腫瘤發(fā)生等過程都有磷酸化蛋白質(zhì)的插足，研究磷酸化蛋白質(zhì)對探究生物學(xué)病變機理有著非常重要的意義。
富集磷酸化蛋白質(zhì)重要性
磷酸化蛋白質(zhì)具有低豐度和高動態(tài)性的特點，因此對磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究首先需要對磷酸化蛋白樣品進行富集，降低樣品復(fù)雜程度和提高磷酸化位點鑒定數(shù)目。固相金屬離子親和色譜法（IMAC）是磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究中常用的磷酸化蛋白質(zhì)富集技術(shù)之一。
Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)
固相金屬離子親和填料
Welchrom® Ti Poss (phosphate ester) 是月旭科技推出的的新一代固相金屬離子親和填料，金屬離子Ti??鰲合在磷酸酯 (phosphate ester) 為配基的多級孔雜化整體材料上形成的親和填料，利用磷酸化基團與固相化的Ti??的高親和力來富集磷酸化蛋白質(zhì)。磷酸化蛋白質(zhì)上的磷酸基團中的三個氧原子分別與富集材料上的三個不同Ti??螯合以形成穩(wěn)定的八面體形的配位結(jié)構(gòu)，這種配位方式提供了良好的結(jié)合能力。該填料具有吸附量大、選擇性好、成本低、適用范圍廣、操作簡單特點。
規(guī)格參數(shù)
| 基架名稱 | 多面體低聚倍硅氧烷（POSS）作為單體所制備的多級孔雜化整體材料 |
| 粒徑范圍 | 幾十微米至幾百微米 |
| 結(jié)合載量 | 63.6 mg/g |
| 適用樣品范圍 | 所有含有磷酸基團的蛋白質(zhì)和肽段 |
| 磷酸化肽段富集特異性 | 97% |
| pH穩(wěn)定性 | 強酸、強堿下均可使用 |
| 化學(xué)穩(wěn)定性 | 常見有機溶劑下均可使用 |
| 保存條件 | 干燥狀態(tài)下室溫保存 |
| 通用性操作步驟 | 采用80% ACN/6% TFA水溶液作為富集溶液，這樣可以在富集過程中，很大程度上避免疏水性非磷酸化肽段的吸附。去除上清溶液后，依次用洗滌溶液A（50% ACN/6% TFA/200 mMNaCl）和溶液B（30%ACN/0.1%TFA）進行洗滌，這樣可以da程度上洗去非特異性肽段。后采用100 μL 10%（wt%）的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。 |
應(yīng)用案例
（a）β-酪蛋白酶解液直接進行分析的 MALDI TOF-MS譜圖和（b）Welchrom® Ti Poss材料富集后分析的MADLI TOF-MS譜圖
實驗條件：0.1µg β-酪蛋白酶解液；采用80% ACN/6% TFA水溶液作為富集溶液，去除上清溶液后，依次用洗滌溶液A（50% ACN/6% TFA/200 mM NaCl）和溶液B（30%ACN/0.1%TFA）進行洗滌，后采用100 μL 10%（wt%）的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。
圖a中，未經(jīng)過富集的β-酪蛋白酶解液樣品MALDI譜圖中，非磷酸化肽段的質(zhì)譜信號峰非常強，嚴重影響了對磷酸化肽段的辨別。而經(jīng)過Ti??-IMAC富集，從MADLI譜圖中（圖b）可以清晰的看到磷酸化肽段以及其去磷酸化肽段的信號峰，而且?guī)缀鯖]有出現(xiàn)任何非磷酸化肽段的信號峰。證實了Welchrom® Ti Poss富集對磷酸化肽段具有良好的富集能力。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
Welchrom® Ti Poss (phosphate ester) | 250mg | ATI001 |
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