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操作方法:

1. 在96孔板中配制100 μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí) (在37℃，5% CO2的條件下)。

2. 向培養(yǎng)板加入10 μl不同濃度的待測物質(zhì)。如果測定細(xì)胞活性，則不需要2-3步驟，直接從第四步操作。

3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,  12, 24或48小時(shí))。

4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù))。

5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

6. 用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。

注意事項(xiàng):

1）CCK-8試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化反應(yīng)，如果待檢測體系中有較多還原劑（或抗氧化劑）會(huì)造成背景O.D值升高，干擾檢測結(jié)果。如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑，請(qǐng)檢查背景的O.D值，即測定、比較空白培養(yǎng)基加入藥物與不加藥物的培養(yǎng)基（含細(xì)胞）在加入CCK- 8試劑后的O.D值，如果空白O.D值明顯偏高，則說明有反應(yīng)，應(yīng)設(shè)法去除或折算干擾因素。

2）如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測。細(xì)胞培養(yǎng)基酚紅不影響測定結(jié)果。

3）為使CCK-8試劑盒培養(yǎng)基充分混勻，減少CCK-8在移液器上的殘留，建議加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑，混勻后加樣。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。