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淋巴細胞分離液

閱讀:3063發(fā)布時間:2015-12-24

分離目的  
方便在人體外對機體各種免疫細胞分別作鑒定,計數(shù)或功能測定。  淋巴細胞分離以后可以做淋巴細胞抗原片制備,E花環(huán)試驗,淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗,淋巴細胞培養(yǎng)(需無菌操作)    【分離原理】    人 淋巴細胞的方便來源是外周血,分離的原則是收率較高,純度較好,失活較低,根據(jù)不同試驗有相對純度,無論采用哪種方法,應(yīng)盡zui大可能保持細胞應(yīng)有活性。分 離的技術(shù)可根據(jù)細胞的物理性狀和表面標志設(shè)計,根據(jù)不同實驗?zāi)康目刹捎妹芏忍荻入x心法、吸附分離法和其它特殊分離法。此次實驗采用的1就是密度梯度離心法。其原理是:人外周血中各種細胞的密度不同,人紅細胞密度為1.093,粒細胞為1.092,淋巴細胞為1.074±0.001。密度梯度離心法的原理主要根據(jù)各類血細胞比重的差異,利用比重介于某兩類細胞之間的細胞分離液對血液離心,使一定比重的血細胞依相應(yīng)的密度梯度分布于不同的獨立帶,從而達到分離的目的。      
材料
1、肝素抗凝管,普通管(負壓),采血針,血清收集管 2、淋巴細胞分離液(比重1.077 – 1.080 g/mL)。 3、無Ca++、Mg++、Hank's 液  4、刻度吸管、毛細吸管、離心管、離心機等。  5置于冰箱的冷丙酮(固定細胞,保持細胞的完整性)   
方法
1.采靜脈血2ml加入肝素抗凝管(或枸櫞酸鈉),3ml加入普通管。  2.普通管斜面放置30MIN,此時可分離淋巴細胞。用竹簽將血塊輕輕剝離管壁(主張用玻璃棒),2000rPm離心20分鐘,用毛細吸管吸取上清(血清)于血清收集管中,于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫糜谝院蟮腅LISA實驗,對流免疫電泳實驗和傷寒試管凝集實驗,溶血反應(yīng),免疫比濁測定補體C3或C4等等。(剝離時也可用毛細吸管輕輕剝離) 

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