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菌種的保藏一般選用哪種辦法?
閱讀：1707 發(fā)布時(shí)間：2020-11-5菌種的保藏一般選用哪種辦法?液氮罐廠家表示液氮超低溫保藏法是現(xiàn)在保存微生物菌種*牢靠的辦法，多數(shù)*級(jí)菌種保藏單位都采用此法。
1、準(zhǔn)備安培管 用于液氮保藏的安培管，要求能耐受溫度忽然改變而不致決裂，因而，需求采用硼硅酸鹽玻璃制造的安培管。安培管的大小通常使用75×10mm的安培瓶。
2、加保護(hù)劑與滅菌 保存細(xì)菌、酵母菌或霉菌孢子等容易渙散的細(xì)胞時(shí)，則將空安培管塞上棉塞，在壓力0.11MPa，溫度121℃條件下滅菌15min;若保存霉菌菌絲體則需在安培管內(nèi)預(yù)先參加保護(hù)劑，如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液，參加量以能浸沒今后參加的菌種塊為限，而后再進(jìn)行高壓滅菌。
3、接入菌種 將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液，裝入已滅菌的安培管;霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內(nèi)切取菌落圓塊，放入含有保護(hù)劑的安培管內(nèi)，然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無縫隙。
4、凍住 再將已封口的安培管以每分鐘下降1℃的慢速凍住至-30℃。若細(xì)胞急劇冷凍，則在細(xì)胞內(nèi)會(huì)構(gòu)成冰的結(jié)晶，因而下降存活率。
5、保藏 經(jīng)凍住至-30℃ 的安培管當(dāng)即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內(nèi)，然后再將小圓筒放入液氮保藏器內(nèi)。液氮保藏器內(nèi)的氣相為-150℃，液態(tài)氮為-196℃。
6、恢復(fù)培養(yǎng) 保藏的菌種需求用時(shí)，將安培管取出，當(dāng)即放入38～40℃的水浴中進(jìn)行急劇凍結(jié)，直到全部融化為止。再打開安培管，將內(nèi)容物移到適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
綜上所述，此法除了適宜于一般微生物的保藏外，對(duì)于一些用冷凍干燥法都難以保藏的微生物如支原體、衣原體、氫細(xì)菌、難以構(gòu)成孢子的霉菌、噬菌體及動(dòng)物細(xì)胞都可長時(shí)間保藏，并且不易發(fā)作變異。缺點(diǎn)是需求特別設(shè)備，以上內(nèi)容僅供了解，如有問題請與咱們?nèi)〉寐?lián)系以便及時(shí)調(diào)整。