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ELISA試劑盒首要考慮的條件

閱讀:1102      發(fā)布時(shí)間:2015-12-7
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    在ELISA試劑盒測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。拋開品牌、價(jià)格來說。

    選擇ELISA試劑盒首要考慮這幾個(gè)條件:

    1、編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

    2、加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50?l。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40?l,然后再加待測(cè)樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不 觸及孔壁,小鼠ELISA試劑盒輕輕晃動(dòng)混勻。

    3、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

    4、配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

    5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。

    測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)濃度的抗原ELISA試劑盒反應(yīng)的光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)得待測(cè)樣品ELISA試劑盒反應(yīng)的光密度,從而查得抗原量。在標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)法中,定酶標(biāo)記抗原的酶活性為100%,在加入作為標(biāo)準(zhǔn)樣品的未標(biāo)記抗原后,以酶活性降低的百分率繪制曲線,從曲線上查得待測(cè)抗原的量。至于對(duì)抗體的定量,則要繪制出競(jìng)爭(zhēng)抵制曲線。在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),需進(jìn)行空白對(duì)照測(cè)定,進(jìn)行校正?;蛘咴跍y(cè)定時(shí),將對(duì)照液作為零點(diǎn)測(cè)定點(diǎn)。

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