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共聚焦顯微鏡的組成介紹
閱讀：2618 發(fā)布時間：2020-4-30
共聚焦顯微鏡也叫激光掃描共聚焦顯微鏡，普遍用于熒光成像和細胞分析，它成像清晰、放大倍數(shù)大、分辨率高，是生物醫(yī)學領域中強有力的研究工具。共聚焦顯微鏡可以進行細胞形態(tài)定位、立體結(jié)構(gòu)重組、動態(tài)變化過程等研究，并能提供定量熒光測定、定性圖像分析等研究手段，結(jié)合其他相關生物技術，在形態(tài)學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域有廣泛應用。
共聚焦顯微鏡主要組成包括：顯微鏡、激光光源、掃描裝置、檢測器、計算機系統(tǒng)(包括數(shù)據(jù)采集，處理，轉(zhuǎn)換，應用軟件)、圖像輸出設備、光學裝置和共聚焦系統(tǒng)。
1、激光器：隨著激光技術的飛速發(fā)展，共聚焦顯微鏡可以根據(jù)研究需要選擇不同的激光器、如：R-HeNe(633nm)、ArUV(351、364nm)、HeCd(442nm)、AR(458、477、488、514nm)、ArKr(488、568、647nm)、Kr(568nm)、G-HeNe(543nm)、Diode(405nm)等。
2、照明針孔：照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的。激光經(jīng)照明針孔形成點光源，相干性好，頻率、振動方向、相位高度一致。
3、光束分離器：從樣晶上反射和散射的光與熒光束混合在一起，所以需要用光束分離器將激發(fā)和釋放光束分開。
4、物鏡：選大數(shù)值孔徑平場復消色差物鏡為好，有利于熒光的采集以獲得更清晰的成像。
5、焦平面：激光點光源照射標本，在焦平面處聚焦，激發(fā)熒光標記的樣本發(fā)射熒光，形成焦點光斑。該光斑經(jīng)過物鏡、光束分離器等一系列裝置的處理，分別在照明針孔及探測器針孔兩處聚焦，共聚焦的含義由此而來。
6、探測器針孔：起到空間濾波器的作用。大限度地阻礙非聚焦平面散射光和聚焦平面上非焦點斑以外的散射光，以保證探測器針孔所接受到的熒光信號全部來自于樣品光斑焦點位置，因此樣品上衍射聚集光斑和探測器針孔成像光斑包含相同信息。
7、探測器：用光靈敏度*、響應速度極快的電倍增管(PMT)檢測激發(fā)熒光，轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘杺鬏斨劣嬎銠C，從而得到細胞或組織內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖像。