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上海乾思生物科技有限公司

侵襲小室實驗服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)

時間:2015-9-1閱讀:110

關(guān)鍵詞:侵襲小室實驗服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌侵襲小室實驗服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
侵襲小室實驗服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:   
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>侵襲小室小室制備
① 包被基底膜:
用50mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面,4℃風(fēng)干。如果需要在下室面鋪FN的話,可將200ul槍頭的剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原(collagen)的話,一般配成0.5mg/ml,直接用槍吸了涂在膜上。
② 水化基底膜:
吸出培養(yǎng)板中殘余液體,每孔加入50ul含10g/LBSA的無血清培養(yǎng)液,37℃,30min。
另有tianjin_glioma戰(zhàn)友提供的方法:在上室的聚碳酸酯膜上加入稀釋后的Matrigel (3.9ug/ul) 60-80μl (注意體積不可太大,以剛把聚碳酸酯膜浸濕為),置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝膠。
有基質(zhì)膠的Transwell小室制備
Chemicon公司的ECM550系列說明書要求,將小室放入培養(yǎng)板中,在上室加入300μl預(yù)溫的無血清培養(yǎng)基,室溫下靜置15-30min,使基質(zhì)膠再水化。再吸去剩余培養(yǎng)液。
制備細胞懸液
① 制備細胞懸液前可先讓細胞撤血清饑餓12-24h,進一步去除血清的影響。但這一步并不是必須的。
② 消化細胞,終止消化后離心棄去培養(yǎng)液,用PBS洗1-2遍,用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸。調(diào)整細胞密度至1-10×105。
具體實驗時采用密度要自己摸索,因為不同細胞,其侵襲能力是不同的。個人經(jīng)驗,細胞量過多,穿過膜的細胞會過多過快,如果zui后用計數(shù)法統(tǒng)計結(jié)果的話將難以計數(shù);而過少的話,可能還沒到檢測的時間點,所有的細胞都已穿過,因此zui少也要保證在收樣的時候,上室內(nèi)還要有一定量的細胞存在。
個人認為,對照組和處理盡量不要分開計數(shù),因為細胞數(shù)目的差異會嚴重影響實驗結(jié)果。如果需要對細胞預(yù)處理而不得不分開計數(shù),那么計數(shù)一定要多重復(fù)幾次,力求準確,盡量保證對照組和處理組細胞密度一致。
接種細胞
① 取細胞懸液100-200μl加入Transwell小室,不同公司的、不同大小的Transwell小室對細胞懸液量有不同要求,請參考說明書。24孔板小室一般200μl。
② 24孔板下室一般加入500μl含F(xiàn)BS或趨化因子的培養(yǎng)基,不同的培養(yǎng)板加的量有不同要求,具體請參考說明書。這里要特別注意的是,下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生,一旦產(chǎn)生氣泡,下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了,在種板的時候要特別留心,一旦出現(xiàn)氣泡,要將小室提起,去除氣泡,再將小室放進培養(yǎng)板。
③ 培養(yǎng)細胞:常規(guī)培養(yǎng)12-48h(主要依癌細胞侵襲能力而定)。時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外,處理因素對細胞數(shù)目的影響也不可忽視。
通過給細胞染色,可在鏡下計數(shù)細胞
① 用棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細胞
② 染色:常用的染色方法有結(jié)晶紫染色、臺肦藍染色、Giemsa染色、蘇木精染色、伊紅染色等。
3421    ( 24孔,孔徑5.0um)    濾膜直徑:6.5mm;濾膜孔徑:5.0μm。48個/箱    720/1100    1,535
3422    ( 24孔,孔徑8.0um)    濾膜直徑:6.5mm;濾膜孔徑:8.0μm。48個/箱    760/1100    1,535
3413    ( 24孔,孔徑0.4um)    濾膜直徑:6.5mm;濾膜孔徑:0.4μm。48個/箱    850/1220    1,730
3415    ( 24孔,孔徑3.0um)    濾膜直徑:6.5mm;濾膜孔徑:3.0μm。48個/箱    750/1098    1,535
3401    ( 12孔,孔徑0.4um)    濾膜直徑:12mm;濾膜孔徑:0.4μm。48個/箱    950/1275    1,780
3402    ( 12孔,孔徑3.0um)    濾膜直徑:12mm;濾膜孔徑:3.0μm。48個/箱    950/1266    1,780
3412    ( 6孔,孔徑0.4um)    濾膜直徑:24mm;濾膜孔徑:0.4μm。24個/箱    711/968    1,350
3414    ( 6孔,孔徑3.0um)    濾膜直徑:24mm;濾膜孔徑:3.0μm。24個/箱    1000/968    1,350
3428    ( 6孔,孔徑8.0um)    濾膜直徑:24mm;濾膜孔徑:8.0μm。24個/箱    710/968    1,350
3419    Transwell皿(膜直徑75mm,孔徑0.4um)    濾膜直徑:75mm;濾膜孔徑:0.4μm。12個/箱,1個/皿,12個皿/箱     3,100
3420    Transwell皿(膜直徑75mm,孔徑3.0um)    濾膜直徑:75mm;濾膜孔徑:3.0μm。12個/箱,1個/皿,12個皿/箱     3,100
3450    (6孔,聚酯透明膜,0.4um)    濾膜直徑:24mm,濾膜孔徑:0.4μm。24個/箱    440/615    860
3452    (6孔,聚酯透明膜,3.0um)    濾膜直徑:24mm,濾膜孔徑:3.0μm。24個/箱     950
3460    (12孔,聚酯透明膜,0.4um)    濾膜直徑:12mm,濾膜孔徑:0.4μm。48個/箱    810/1171    1,635
3462    (12孔,聚酯透明膜,3.0um)    濾膜直徑:12mm,濾膜孔徑:3.0μm。48個/箱     1,820
3470    (24孔,聚酯透明膜,0.4um)    濾膜直徑:6.5mm,濾膜孔徑:0.4μm。48個/箱    1200/1220    1,700
3472    (24孔,聚酯透明膜,3.0um)    濾膜直徑:6.5mm,濾膜孔徑:3.0μm。48個/箱     1,700

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