Ca++Mg++ ——ATP酶活性检测试剂盒

产品英文名：Ca++Mg++ ——ATPase Assay Kit

产品货号：BC0960               产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：50管/24样                       产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：260
库存状态：现货                          
关键字：ATP酶活性检测试剂盒|ATP检测试剂盒|

简要介绍：
Ca++ Mg++-ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP 水解生成ADP 和无机磷。
    根据Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP 酶活性高低。


产品详细描述
产品内容：
试剂一：液体30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分混匀待用，现用现配。用不完的试剂-20℃可保存一周。
试剂四：液体2mL×1 瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。用时加入3mL双蒸水， 4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入15mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。
试剂七：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入15mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。
试剂八：液体15mL×1 瓶，室温保存。
标准品：10mmol/L 标准磷贮备液1mL×1 支，4℃保存。
0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将标准品 20倍稀释，即取0.1mL标准品加1.9mL蒸馏水充分混匀。
定磷剂的配制：按H₂O: 试剂六:试剂七:试剂八=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
    Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
    根据Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。
需自备的仪器及用品:
    可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品酶液的制备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长660nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应（在EP管中加入下列试剂）

3定磷（1.5mLEP管中依次加入下列试剂）

                 混匀，40℃水浴10 min，冷却室温，在 660nm处比色。
三、计算
1、血清（浆）Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATPase活力的计算:
定义：规定每小时每毫升血清（浆）中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力（U/mL）= C标准管×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V总÷V样÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）
2、组织、细菌或细胞中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATPase活力的计算：
（1）按蛋白浓度计算：
定义：规定每小时每毫克组织蛋白中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/ mg)= C标准管×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V总÷（Cpr×V样）÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
定义：规定每小时每克组织中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/g)= C标准管×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V总÷(V样÷V样总×W)÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
定义：规定每小时每1万个细菌或细胞中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/10⁴)= C标准管×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V总÷(V样÷V样总×500)÷T=0.015×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）
    C标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V总：酶促反应总体积，0.5mL；V样：加入样本体积，0.2mL ；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1/6小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意事项：
1、由于每一个样都必须做对照，本试剂盒50管只能测 24份Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。避免磷污染是检测成败的关键。
3、空白管和标准管只要做一管。

相关文献：
《Apigenin suppresses the apoptosis of H9C2 rat cardiomyocytes subjected to myocardial ischemia?reperfusion injury via upregulation of the PI3K/Akt pathway》 作者:Zhengwen Zhou, Yue Zhang, Luning Lin, Jianmei Zhou 期刊:Molecular Medicine Reports 影响因子:1.851 PMID:29901074
《Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na+/K+-ATPase to induce ovarian follicular patency for yolk protein uptake》 作者:Yu-Pu Jing, Hongli An, Shanjing Zhang, Ningbo Wang, Shutang Zhou 期刊:Journal of Biological Chemistry 影响因子:4.106 PMID:

Ca++Mg++ ——ATP酶活性检测试剂盒