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线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒
分光光度法
货号: BC0510
规格：25 管/24 样
产品内容：
试剂一：25mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：5mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：0.5mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂四：25mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂五：1mL×1 支，-20℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 2mL 蒸馏水，现配现用；
工作液的配制：临用前将试剂五转移到试剂四中混合溶解，现配现用。
线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒产品简介： 复合体Ⅰ（EC 1.6.5.3）又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶，广泛存在于动物、植物、 微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从 NADH 传 递给 CoQ，同时可使 O2还原生成 O2.-，是呼吸电子传递链上产生 O2.-的主要部位。测定该酶活性， 不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。 复合体Ⅰ能够催化 NADH 脱氢生成 NAD+，在 340nm 下测定 NADH 的氧化速率计算出该酶活 性的大小。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒操作步骤：
一、样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离： (1) 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研 钵匀浆。 (2) 将匀浆 600g， 4℃离心 5min。 (3) 弃沉淀，将上清液转移另一离心管中，11000g4℃离心 10min。 (4) 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄露的复合体Ⅰ（此步可选做）。 (5) 步骤（4）中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超生波破碎（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3 秒，间歇 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅰ酶活性测定。
二、测定步骤： 1. 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长340nm，蒸馏水调零。 2. 样本测定 (1) 工作液于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）孵育 5min。 (2) 在 1ml 石英比色皿中加入 40uL 样本、800uL 工作液和 60uL 试剂六，混匀，记录 340nm 处初 始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2，计算ΔA=A1-A2。
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