国产日产欧美精品-亚洲国产综合久久精品-色综合色国产热无码一-亚洲欧美日本国产,免费观看一区二区三区_在线观看片A免费不卡观看_亚洲а∨天堂久久精品_99久无码中文字幕一本久道

您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)

| 注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

17801761073

technology

首頁   >>   技術(shù)文章   >>   promega M1701 使用說明

北京索萊寶科技有限公司

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務(wù)

promega M1701 使用說明

閱讀:2112      發(fā)布時間:2015-6-19
分享:


說明


Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase(MMLV RT,M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶) 是一種RNA 依賴的DNA 聚合酶,可用于長mRNA (>5kb) 為模板的cDNA 合成。該酶是M-MLV 的pol 基因產(chǎn)物,由一個分子量為71kDa 的亞單位組成。M-MLV RT 的RNase H 活性比常用的鳥類成髓細(xì)胞性白血病病毒(Avian Myeloblastosis Virus,AMV) 逆轉(zhuǎn)錄酶弱。


特點


提供5× 反應(yīng)緩沖液:250mM Tris-HCl (pH 8.3,25℃ ),375mM KCl,15mM MgCl2,50mM DTT。

高溫失活:在70℃加熱M-MLV RT 10 分鐘滅活。



儲存條件

儲存于-20℃。


產(chǎn)品目錄號:  M1701 M1705 
 
 M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶簡明操作步驟 
 cDNA*鏈合成操作步驟: 
請使用者準(zhǔn)備: 
z 重組 RNasin?核酸酶抑制劑 (目錄號 N2511) 
z dATP,10mM
z dCTP,10mM
z dGTP, 10mM
z dTTP, 10mM 
z 無核酸酶的水 
 
1. 在一支無核酸酶污染的小離心管中加入: RNA 2ug 引物 1ug 無核酸酶水補(bǔ)齊 15ul 加熱離心管到 70℃,5 分鐘,這樣可以打開模板的二級結(jié)構(gòu)。然后立即在冰上冷卻,以避免重新形成二級結(jié)構(gòu)。短暫離心,使溶液歸于管底。 
 
2. 按以下順序在復(fù)性的引物/模板管(即以上小離心管)
中加入下列組分: 
注意:不要改變引物與 mRNA的比例。 
M-MLV 5XReaction Buffer 5ul 
dATP,10mM 1.25ul 
dCTP,10mM 1.25ul 
dGTP, 10mM 1.25ul 
dTTP, 10mM 1.25ul 
重組 RNasin?核酸酶抑制劑 25units M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶 200units 加無核酸酶水補(bǔ)齊 25ul 
 
3. 輕彈離心管混合溶液。若使用隨機(jī)引物,在 37℃孵育 60分鐘進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng);若使用其它引物(Oligo (dT)或基因特異引物),則在 42℃孵育 60分鐘進(jìn)行反應(yīng)。 
 
4. 第二條鏈合成可使用您選擇的操作方法,也可參考: 
Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989) In: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 8.64. 
 
注意:M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶緩存液與許多下游應(yīng)用相容。在進(jìn)行第二鏈合成或 PCR 之前,一般無需使用酚抽提及乙醇沉淀純化合成的*鏈 cDNA。 

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
在線留言
淮北市| 内丘县| 萝北县| 德令哈市| 乌兰浩特市| 香港| 荆州市| 朔州市| 林芝县| 辛集市| 灵山县| 鹤山市| 阿拉善右旗| 苏尼特右旗| 徐闻县| 清苑县| 北辰区| 乐都县| 山东| 青川县| 宝丰县| 闽侯县| 潢川县| 襄垣县| 琼中| 云浮市| 郓城县| 永登县| 浦县| 石泉县| 泰兴市| 旌德县| 奉节县| 崇州市| 报价| 平安县| 永年县| 甘肃省| 普定县| 璧山县| 霍林郭勒市|