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產(chǎn)品名稱:ProteanFect CRISPRMax Ultra原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品品牌:西湖凝聚體
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ProteanFect CRISPRMax Ultra轉(zhuǎn)染試劑PT08 產(chǎn)品介紹
西湖凝聚體推出的ProteanFect CRISPRMax Ultra,是解決原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染難題的革新方案。通過非病毒遞送系統(tǒng),該試劑可精準(zhǔn)導(dǎo)入Cas9/sgRNA復(fù)合物,在人原代T細(xì)胞中實現(xiàn)超80%的TRAC基因編輯效率,適用于免疫·治療與基因功能研究。
產(chǎn)品特點
原代細(xì)胞優(yōu)化:添加Reagent C,增強轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性,配合CD3/CD28磁珠活化策略,顯著提升編輯成功率。
靈活適配:支持懸浮轉(zhuǎn)染(如消化貼壁細(xì)胞)與貼壁直接轉(zhuǎn)染,滿足多樣化實驗需求。
快速驗證:EGFP mRNA陽性對照5-48小時即可觀察熒光表達,大幅縮短實驗周期。
高性價比:凍干試劑長期保存,開封后按需使用,降低實驗成本。
代理現(xiàn)貨供應(yīng)
華雅思創(chuàng)生物®作為西湖凝聚體核心代理商,提供ProteanFect CRISPRMax Ultra現(xiàn)貨及定制服務(wù),下單即發(fā),全程技術(shù)指導(dǎo)!
華雅思創(chuàng)生物公司介紹
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產(chǎn)品品牌:西湖凝聚體
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常見問題
如何提升轉(zhuǎn)染效率 轉(zhuǎn)染條件需根據(jù)細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化。、
建議:1)延長轉(zhuǎn)染時間:根據(jù)細(xì)胞狀 態(tài)適當(dāng)延長轉(zhuǎn)染時間。通常原代細(xì)胞不超過 30 分鐘,細(xì)胞系不超過 2 小時。2)提升 ProteanFect 轉(zhuǎn)染量:適當(dāng)增加轉(zhuǎn)染體系至初始的 1.5-2.5 倍。
2. 細(xì)胞系轉(zhuǎn)染前處理 1)為獲得良好的轉(zhuǎn)染效率,建議使用活性超過 90%的細(xì)胞,可以通過臺盼藍(lán)染色測定 細(xì)胞活性。2)不建議使用傳代次數(shù)超過 15 次的細(xì)胞進行實驗。3)新復(fù)蘇的細(xì)胞在轉(zhuǎn)染實 驗前需傳代 2-3 次,待細(xì)胞恢復(fù)正常生長后使用。
3. 原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染前預(yù)處理 對于原代細(xì)胞,充分活化有助于提高轉(zhuǎn)染效率,因此建議在適當(dāng)活化后進行轉(zhuǎn)染。例如, 人原代 T 細(xì)胞可使用 CD3/CD28 磁珠或抗體進行激活,激活 2-10 天內(nèi)均可轉(zhuǎn)染。(詳細(xì)操 作和技巧可參考微信公眾號“西湖凝聚體"中的轉(zhuǎn)染攻略→人原代 T)。
4. 關(guān)于試劑盒中 EGFP mRNA 陽性對照的使用建議 首·次嘗試時,建議設(shè)置陽性對照組(EGFP mRNA),以檢測實驗操作和試劑的有效性。 使用 96 孔板的細(xì)胞量即可,節(jié)省細(xì)胞和試劑。具體操作見表 2。
5. RNP 的投入量如何確定 RNP 中 Cas9 蛋白和 sgRNA 的摩爾比推薦在 1:1-1:2.5 之間。以 96 孔細(xì)胞量的轉(zhuǎn) 染體系為例,Cas9 蛋白的投入量在 0.8 μg-1.6 μg ,已能夠達到單基因編輯的理想效率。
6. 轉(zhuǎn)染時的細(xì)胞數(shù)范圍 說明書中提供了最佳轉(zhuǎn)染條件下的細(xì)胞數(shù)量范圍,但在特殊情況下,即使細(xì)胞數(shù)量較少, 也可以進行轉(zhuǎn)染。以 96 孔板為例,建議細(xì)胞數(shù)量不低于 4×103/孔,以確保后續(xù)檢測的可靠 性。
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