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上海优宁维生物科技股份有限公司>>技术文章>>细胞培养一般方法有哪些

细胞培养一般方法有哪些

阅读:800        发布时间:2022-11-9
   细胞培养首先分为原代培养和传代培养.
  一、原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存;
  二、传代培养首*行细胞复苏:
  1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
  2.在无菌台内将培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液;也可复苏当时离心(1000rpm 5min左右)后,培养基重悬培养,适时换液.
  细胞传代:
  1.贴壁细胞:对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心(1000rpm 5min左右),新鲜培养基重悬沉淀,加入培养基后继续培养或实验.
  2.悬浮细胞:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心(1000rpm,5min左右)后加入培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入培养基继续培养.

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