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外泌体来源长链非编码RNA H19促进成骨和血管生成

阅读:600        发布时间:2022-8-30


骨质疏松症是一种常见的代谢性骨病,其表现为骨量低和骨组织微观结构恶化。这会导致骨脆性和骨折的风险增加。研究数据表明胱硫氨酸β合成酶(CBS)缺乏症的患者通常患有骨质疏松症和骨折。然而,目前的主要挑战是了解CBS+/-条件下的骨髓间充质干细胞功能障碍的病因,以及制定临床策略来?;ふ庑┗颊叩墓趋澜】怠V瘟乒趋酪斐5牟呗杂卸嘀侄嘌?,如支架材料与生长因子的结合、细胞或自体骨移植等。


研究办法及结果
1. 通过RT2 lncRNA PCR Array筛?。?LAMM-001Z, Mouse LncRNA finder, ),在骨髓成骨过程中骨髓干细胞(BMMSC-Exo)的外泌体中发现了一种骨特异性的长链非编码RNA-H19(lncRNA-H19/lnc-H19)。



图注:lncRNA PCR阵列的热图显示了一个具有代表性的外泌体组中的lncRNA差异表达。黑色箭头表示lnc-H19的表达。


2. 通过生物信息学分析,进一步发现了可以与lnc-H19结合的miR-106a的种子序列。通过荧光素酶报告基因实验,证明了miR-106a与靶基因血管生成素1(Angpt1)的直接结合。




图注:lnc-H19中miR-106a结合位点的示意图;Angpt1 3‘UTR中miR-106a结合位点示意图



图注:miR-106a对HUVEC培养中含有Angpt1 3‘UTR的报告基因荧光素酶活性的影响。


3. 将(Angpt1)和Exo单独注入CBS+/--ECs,并研究了Tie-2的激活情况。表面Exo或EC+Ext1(100 ng/ml)诱导Tie-2(Y992)和eNOS(S1179)的磷酸化。



4. 采用免疫缺陷裸鼠模型和细胞,来评估BMMSC-Exo对体内和体外血管生成的影响。并通过显微ct扫描,监测了实验小鼠骨骼的显微结构变化。发现BMMSC-Exo可以在体内和体外促进血管生成以及成骨。


图注:Exo促进cbs杂合子小鼠的体内外成骨



MSCs-Exo在体外和体内增强血管生成。

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