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資源名稱:  金龜子綠僵菌小孢變種保存
種屬:Metarhiziumanisopliaevar.anisopliae
安全等級   1
模式菌株   no
應用領域   生物防治
培養(yǎng)方法   
培養(yǎng)基   14
生長條件   25-28℃
金龜子綠僵菌小孢變種保存檢測方法： 
1．將病人標本和/或液狀對照品放至室溫（15-30℃），輕輕混勻。測試前從包裝袋中取出檢測卡平放。
2．將1根Binax樣本拭子浸入要測試的標本中，*浸沒拭子頭。如果拭子有滴水，將拭子靠在收集容器的邊上，排去多余的液體。
3．檢測卡內(nèi)部的右手邊有兩個孔，將拭子插入底部的孔中（拭子孔），穩(wěn)步向前推，使整個拭子頭在上部的孔中可見，不要取出拭子。
4．垂直持放A試劑瓶，高出檢測卡上方1/2到1英寸，慢慢向底部的孔中加入3滴A試劑。
5．立即從檢測卡的右緣揭去粘附襯，封閉檢測卡，過15分鐘在窗口判讀結果。15分鐘后讀取的結果可能不準確。然而，有些陽性病人不到15分鐘就出現(xiàn)可見樣品線。
金龜子綠僵菌小孢變種保存注意事項：
1.  取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。
2.  凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜（DMSO）對細胞不是*無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作 較大，因此，必須在1-2min內(nèi)使凍存液*融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜（DMSO）選擇進口產(chǎn)品。
3.  離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。
4.  離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除 DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大， 死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液 體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結果無有異常。
5.  細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。
6.  復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。
7.  加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響 細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是 10％DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。

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