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細胞培養(yǎng)過程中遇到的常見問題及解決的辦法
細胞培養(yǎng)過程中遇到的常見問題及解決的辦法：
1、培養(yǎng)液pH值變化太快：
?。?）CO2張力不對;培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊;NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足；培養(yǎng)液中鹽濃度不正確。細菌、酵母或真菌污染。按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應(yīng)CO2濃度為5％到10％。
?。?）改用不依賴CO2培養(yǎng)液。松開瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hank’s鹽配制的培養(yǎng)液。丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
2、培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變：
用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來。冰凍保存培養(yǎng)液。用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后除菌。將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。
3、細胞培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，同時pH發(fā)生變化：
細菌或真菌污染//丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
4、培養(yǎng)細胞不貼壁：
胰蛋白酶消化過度；支原體污染；培養(yǎng)液中無貼壁因子。縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
5、懸浮細胞成簇：
細胞培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋放DNA。用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。分離培養(yǎng)物，檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。用DNase處理細胞。
6、原代細胞培養(yǎng)物污染：
原代培養(yǎng)組織在進入培養(yǎng)前已污染。培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復(fù)沖洗組織。