QPK-201、QPK-101、QPK-212/TOYOBO試劑盒

QPK-201、QPK-101、QPK-212/TOYOBO試劑盒?

本產(chǎn)品是在 Taq DNA polymerase 基礎(chǔ)上開發(fā)的通用性很高的Realtime PCR 用 2×濃度的預(yù)混液?？色@得重復(fù)性良好的結(jié)果。

各試劑分別按以下所示進(jìn)行使用。

QPK-201、QPK-101、QPK-212/TOYOBO試劑盒

*逆轉(zhuǎn)錄酶「ReverTra Ace®」[Code No. TRT-101]與RNase inhibitor [Code No. SIN-201] 組合，就可以進(jìn)行one-step PCR。
**可用于TaqMan® probe分析法及Hybridization probe分析法等。 
QPK-201、QPK-101、QPK-212/TOYOBO試劑盒

特征

●高特異性
為了抑制非特異性反應(yīng)，本產(chǎn)品采用了抗Taq聚合酶抗體的熱啟動(dòng)法。

●適用于各種用途
可用于探針分析法及SYBR® Green I分析法。

●適用于各類儀器
產(chǎn)品中還添加了 Passive Reference，可應(yīng)用于需要校正的儀器（Applied Biosystems®、StepOnePlusTM等）。
還可用于使用玻璃毛細(xì)管類型的檢測(cè)儀器（Roche Diagnostics公司的LightCycler®等）。

●提高了可靠性 [SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-(QPK-212)]
通過對(duì)組分的優(yōu)化，抑制了SYBR® Green 分析時(shí)引物二聚體等問題的產(chǎn)生，提高了可靠性和重復(fù)性。

●使用了高純度Taq DNA polymerase
PCR的基本性能得到了改善.

QPK-201、QPK-101、QPK-212/TOYOBO試劑盒

實(shí)驗(yàn)例

1. SYBR® Green 分析體系與其他公司產(chǎn)品的反應(yīng)性能比較

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本例將SYBR® Green 分析體系與其他公司產(chǎn)品的反應(yīng)性能進(jìn)行了比較。首先將人的基因組DNA各作10倍梯度稀釋（從30ng到3pg的5個(gè)梯度），以稀釋液為樣品進(jìn)行PCR，擴(kuò)增β-actin基因。結(jié)果顯示，使用本產(chǎn)品時(shí)，在擴(kuò)增效率及起峰早晚方面有顯著優(yōu)勢(shì)。另外，引物二聚體的產(chǎn)生也不明顯。

（儀器：使用BioFlux公司的LineGene）

2. 相關(guān)性分析的討論 
使用本公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒ReverTra Ace -α-®，以HeLa細(xì)胞來源的Total RNA(100ng)為模板，使用random primer合成1st strand cDNA之后，稀釋10倍后作為標(biāo)準(zhǔn)品，各作5倍梯度稀釋，檢測(cè)β-actin基因。結(jié)果顯示，所有濃度都得到了良好的擴(kuò)增曲線。

（使用Roche公司的LightCyclerTM）

3. 與其他公司產(chǎn)品性能的比較【相關(guān)性】 
嚙齒類動(dòng)物來源的基因組DNA（以10倍稀釋系列：10ng、1ng、0.1ng、0.01ng(n=2)）為模板，通過相關(guān)性分析進(jìn)行目的基因（約80bp）的檢測(cè)。結(jié)果顯示，A公司的試劑產(chǎn)生了非特異性擴(kuò)增及引物二聚體，但用SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-卻得到了良好的擴(kuò)增。另外，Ct值的間隔也是相等的，可定量擴(kuò)增區(qū)域也非常廣。
 
（儀器：使用BioFlux公司的LineGene）

4. TaqMan® 法的應(yīng)用 
使用本公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒ReverTra Ace -α-®，以HeLa細(xì)胞來源的Total RNA(100ng)為模板，使用random primer合成1st strand cDNA之后，稀釋10倍后作為標(biāo)準(zhǔn)品，各作5倍梯度稀釋，使用Applied Biosystems公司的Pre-Developed TaqMan® Assay Reagents對(duì)β-actin進(jìn)行TaqMan®法檢測(cè)。結(jié)果顯示，所有濃度都得到了良好的擴(kuò)增曲線。沒有擴(kuò)增的曲線是空白對(duì)照（蒸餾水）。

（儀器:使用ABI PRISM® 7700）

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• 注意事項(xiàng)

• 關(guān)于PCR相關(guān)產(chǎn)品的標(biāo)簽許可事項(xiàng)，請(qǐng)瀏覽本公司的(www.bio-toyobo。。ｃｎ) [PCR相關(guān)產(chǎn)品角]。

• 基本反應(yīng)條件

• 
  滅菌水Xμl
  Master Mix25μl
  各Primer10pmoles each～
  DNA樣品Yμl

  Total Volume50μl

  Cycle
  95℃    60sec.
         ↓
  95℃    15sec.
  55～65℃    15sec. 40cycles
  72℃    45sec.
  ※退火溫度，請(qǐng)根據(jù)引物的Tm在55～65℃之間進(jìn)行調(diào)整。
  ※延伸反應(yīng)時(shí)間，只要擴(kuò)增長(zhǎng)度在200bp左右，設(shè)定為45sec就可以。
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