BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
产品信息
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
FS1026-500T | BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) | 500T | 280.00 |
FS1026-2500T | BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) | 2500T | 800.00 |
FS1026-5000T | BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) | 5000T | 1500.00 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(蛋白提取与定量)BCA蛋白浓度测定试剂盒(蛋白提取与定量)
产品描述
BCA(Bicinchoninic acid)法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法?;谒蹼宸从Γ丛诩钚曰肪诚碌鞍字式?/span>Cu2+还原成Cu+,产生一种紫蓝色复合物,在562nm处有高的吸光值,该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。
该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测,也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量(100μl)的蛋白样品,但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20(v/v),从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便,仅需少量(10-25μl)的蛋白样品。不过,由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8(v/v),某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低**检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒,比色皿法分别可做50次,250次,500次。酶标法分别可做500次,2500次,以及5000次。
产品特点
- 灵敏度高,小检测蛋白量可达0.2μg,检测浓度下限达到10μg/ml。
- 速度快,比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
- 线性范围广,20-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。
- 不受大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80等。(详情见附录)
室温运输。试剂盒室温保存即可,其中短期不用的蛋白标准品(BSA)也可放到4 ºC保存。有效期12个月。
注意事项
- 使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,因此需注意保持定时和定温,以确保精确定量。
- 低温或长期保存,若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染,则应丢弃,避免对实验结果造成影响。
- 实验操作规范,提高上样量的精确度。
- 每次测定都需做相应的标准曲线,因为显色反应与温度和时间的变化有关,精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。
操作方法
一、配制标准品和工作液
1. 配制BSA标准品体系
注:标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制可参考表一。
表一BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围20-2000μg/ml)*
Vial | 稀释液体积(μl) | 2mg/ml BSA体积(μl) | BSA终浓度(μg/ml) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
*如用比色皿检测,每管需加100μl标准品,按3个重复计算,每个浓度至少需配制300μl。
2. 配制BCA工作液
- 计算所需要的总BCA工作液体积。
- BCA工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
- 2.0ml BCA工作液,微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。
- 配制BCA工作液:50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B(A:B=50:1) ,充分混匀。
- BCA试剂B加入BCA试剂A中后,迅速浑浊,通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内,室温条件24h稳定。
二、检测方法
1. 比色皿检测方法(样品:BCA工作液=1:20)
1) 各取100μl标准品和待测样品加入到反应管中。
2) 每管加入2.0ml BCA工作液,混匀。37℃孵育30min。
注意:也可室温孵育2h,或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度,延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限,以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低,可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
- 冷却到室温。在分光光度计上进行检测,设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在10分钟内对所有样品读数。
- :由于BCA反应达不到真正的反应终点,即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是,由于室温下生色比率相当低,因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试,不会导致明显错误。
- 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/ml;Y-终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
2. 微孔板检测方法(样品:BCA工作液=1:8)
1) 各取25μl标准品和待测样品加入到微孔板中。
注:样品与工作液比例为1:8,若样品有限,可使用10μl标准品和待检测样品进行检测(即1:20),这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml。
2) 每孔加入200μl BCA工作液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,37℃孵育30min。
- 冷却到室温,在酶标仪上的540~595nm波长范围处检测吸光度,其中562nm波长为**。
- a)由于酶标板的光径比比色皿短,使得酶标板检测需要更好的样品:BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长,建议延长孵育时间到2h。b)延长孵育时间或者提高样品:BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值,并且降低检测下限和工作线性范围。
- 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/ml;Y-终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。