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蛋白实验中常见的问题

时间:2019-3-29阅读:373
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蛋白实验中的常见问题

1、蛋白样品不能反复冻融;

2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂,以增加蛋白的稳定性;

3、细胞水平要做 Western Blot,一般地 5×106 个细胞提取的蛋白够就足 Western Blot

4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白,所用的去垢剂就要温和得多,建议提取后加上 NaF 去抑制磷酸化酶的活性;

5、若转膜不*,可以加大上样量,还有转移时你可以用降低电流延长时间,转膜液中甲醇的比例多加 510%;

6、如果上样量超载,可以浓缩样品,也可以根据你的目标分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地,超载 30%是不会有问题的。如果已经超了不少了,而且小分子量的也要,可以考虑加大胶的厚度,可以试试 1.5mm comb;

 

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