上海信帆生物科技有限公司
: 传真: 地址:上海市闵行区虹梅南路2500 号
丙酮酸激酶（Pyruvatekinase，PK）试剂盒说明书
一、 测定意义
丙酮酸激酶酶催化糖酵解过程中的zui后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，
也是动植物组织中产生ATP 的关键酶之一，因此测定动植物组织中PK 的活性具有重要意义。
二、 测定原理
在二磷酸腺昔（ADP）存在的条件下丙酮酸激酶能够催化磷酸烯醇丙酮酸（PEP）转化
成丙酮酸，丙酮酸与2, 4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在碱性溶液中显棕
红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比，由此计算丙酮酸激酶活力。三、试验中所需的仪
器和设备
可见分光光度计或酶标仪、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比
色皿或酶标板、蒸馏水
四、试剂的组成和配制
试剂一：粉剂×1 瓶，常温保存，用时加入50mL 双蒸水溶解，4℃保存3 个月；试剂二：液
体13 mL×1 瓶，4℃保存3 个月；
试剂三：粉剂×1 支，常温保存；用时加1mL 双蒸水充分溶解;试剂四：
粉剂×1 支，-20℃保存；用时加1.2 mL双蒸水充分溶解；试剂五：粉剂
×1 支，-20℃保存；用时加550μL 双蒸水充分溶解；试剂六：2 mmol/L
标准液母液1mL，-20℃保存1 个月；试剂七：储备液15 mL，4℃避光保
存3 个月；
试剂八：终止试剂50 mL，4℃保存3 个月；
五、粗酶液的提取
准确称取组织重量，按重量体积比（g/mL）加9 倍试剂一，制成10%匀浆。8000g/min
离心10 min，取上清液待测，同时测定组织蛋白含量。
六、测定步骤
取试剂二11.4mL，试剂三0.69mL，试剂四1.2mL 加入混合液试剂瓶中，该试剂
上海信帆生物科技有限公司
: 传真: 地址:上海市闵行区虹梅南路 2500 号
瓶中含有1.71mL液体，配成总体积为15mL的混合液（该混合液配好后4℃保存1个月），按下表进行操作。
空白孔B
标准孔S
测定孔U
对照孔C
待测样本(μL)
10
10
混合液 (μL)
275
275
275
275
试剂五 (μL)
10
蒸馏水 (μL)
20
10
10
试剂六 (μL)
10
充分混匀，37℃水浴15 分钟
试剂七(μL)
250
250
250
250
充分混匀，37℃水浴15 分钟
试剂八(μL)
750
750
750
750
充分混匀，静置3 分钟，450 nm下测定吸光度
注意：
1. 以上反应体系用1 mL玻璃比色皿测定，若需要用酶标仪测定，将反应体系中各试剂组 成缩小5 倍即可。 2. 粗酶液的提取必须在0℃-4℃中操做完成，以防止酶变性失活。 3. 测定过程中所有试剂必须在冰上放置。
七、动植物组织中PK活力单位的计算：
丙酮酸标准曲线制作：
将2mmol/L的丙酮酸标准品用双蒸水分别稀释成1 mmol/L、0.8mmol/L、0.6mmol/L、0.4mmol/L、0.2mmol/L溶液，按照测定操作表中标准孔体系测定不同浓度的丙酮酸标准品的吸光值。
上海信帆生物科技有限公司
: 传真: 地址:上海市闵行区虹梅南路 2500 号
计算标准曲线公式为y=0.4667χ-0.0013（χ为丙酮酸浓度，mmol/L； y为吸光值）推出：χ=（y+ 0.0013）÷0.4667（χ为丙酮酸浓度，mmol/L；y为吸光值） 单位定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol丙酮酸定义为一个活力单位。
组织中PK活力= （U/mgprot）
（ODU- ODC）-0.00130.4667×15×Cprot
×1000
ODU： 测定孔吸光值； ODC： 对照孔吸光值： Cprot： 待测样本蛋白浓度(mg/mL)； 15 分钟： 反应时间；

www.shxfkj.com elisa试剂盒，进口elisa试剂盒，国产elisa试剂盒，elisa试剂盒价格，农残检测试剂盒，血清，进口血清 -上海信帆生物科技有限公司