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細(xì)胞線(xiàn)粒體分離試劑盒的相關(guān)介紹
英文名:Cell Mitochondria Isolation Kit
規(guī)格:50-100次
細(xì)胞線(xiàn)粒體分離試劑盒是用于快速便捷分離培養(yǎng)細(xì)胞線(xiàn)粒體的試劑盒。
本試劑盒在分離線(xiàn)粒體的同時(shí)可以獲得去除線(xiàn)粒體的細(xì)胞漿蛋白,可用于研究細(xì)胞色素c等線(xiàn)粒體蛋白向胞漿的釋放。
使用本試劑盒分離獲得的線(xiàn)粒體純度較高,并且絕大部分分離獲得的線(xiàn)粒體都含有完整的內(nèi)膜和外膜,并具有線(xiàn)粒體的生理功能。因此本試劑盒分離得到的線(xiàn)粒體可以用于線(xiàn)粒體的生理功能等方面的研究。例如可以使用我公司的C2006 線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)測(cè)定分離得到的線(xiàn)粒體的膜電位。
本試劑盒分離得到的線(xiàn)粒體也可以被試劑盒中的線(xiàn)粒體裂解液或其它適當(dāng)裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。
本試劑盒提供了線(xiàn)粒體制備過(guò)程中勻漿程度的重要判斷指標(biāo),即臺(tái)盼藍(lán)染色,使分離得到的線(xiàn)粒體的質(zhì)量更加有保證。臺(tái)盼藍(lán)染色液為選用試劑,在實(shí)驗(yàn)條件成熟后可以不必使用。
本試劑盒提供了蛋白酶抑制劑PMSF,使勻漿時(shí)蛋白酶的活性被適當(dāng)抑制,這樣在獲得線(xiàn)粒體的同時(shí)還可以獲得有時(shí)有用的去除了大量線(xiàn)粒體的蛋白,在進(jìn)行蛋白或酶活分析時(shí)可以作為對(duì)照。
如果每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量為2000-5000萬(wàn),本試劑盒可以處理50-100個(gè)樣品。
保存條件:-20℃保存,一年有效。其中臺(tái)盼藍(lán)染色液也可以4℃保存,PMSF(晶體)和PMSF(溶劑)在配制成100mMPMSF溶液前可以室溫保存。
注意事項(xiàng):
1、試劑盒中的試劑對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟槐厝渴褂谩?br /> 2、如果不是用于制備線(xiàn)粒體蛋白樣品,線(xiàn)粒體分離試劑和線(xiàn)粒體裂解液中不必加入PMSF。
3、如果用于制備線(xiàn)粒體蛋白樣品,線(xiàn)粒體分離試劑和線(xiàn)粒體裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在線(xiàn)粒體分離試劑或線(xiàn)粒體裂解液加入到樣品中前2-3分鐘內(nèi)加入,以免PMSF在水溶液中很快失效。
4、分離線(xiàn)粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行,所用溶液需冰浴或4℃預(yù)冷。
5、通常在分離線(xiàn)粒體時(shí)前后兩次離心速度選取600g和11,000g,如果希望純度更高,但對(duì)線(xiàn)粒體的得率要求不高,前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g。
6、臺(tái)盼藍(lán)與PMSF對(duì)人體有毒,請(qǐng)注意小心防護(hù)。
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