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細胞凋亡的檢測方法
閱讀：1975 發(fā)布時間：2013-6-18| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 12.5KB |
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細胞凋亡的檢測方法
一、形態(tài)學觀察方法
1）HE染色、光鏡觀察：凋亡細胞呈圓形，胞核深染，胞質濃縮，染色質成團塊狀，細胞表面有“出芽”現(xiàn)象。
2）丫啶橙（AO）染色，熒光顯微鏡觀察：活細胞核呈黃綠色熒光，胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側，可以看見細胞膜呈泡狀膨出以及凋亡小體。
3）臺盼藍染色：如果細胞膜不完整、破裂，臺盼藍染料進入細胞，細胞變藍，則為壞死。如果細胞膜完整，細胞不被臺盼藍染色，則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性，區(qū)別壞死細胞有一定的幫助。
4）透射電鏡觀察：可以看見凋亡細胞表面微絨毛消失，核染色質固縮、邊集，通常呈新月形，核膜皺褶，胞質緊實，細胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現(xiàn)象。
二、DNA凝膠電泳
（一）、檢測原理
細胞發(fā)生凋亡或壞死，其細胞DNA均會發(fā)生斷裂，細胞內小分子量DNA片斷增加，高分子DNA減少，胞質內出現(xiàn)DNA片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規(guī)律的發(fā)生在核小體之間，出現(xiàn)180－200bpDNA片斷，而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂片斷，利用此特征可以確定群體細胞的死亡，并且可與壞死細胞區(qū)別。
（二）結果判斷
正?；罴毎?font face="Times New Roman">DNA 電泳出現(xiàn)階梯狀（LADDER）條帶；壞死細胞DNA電泳類似血抹片時的連續(xù)性條帶。
三、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）核小體測定
凋亡細胞的DNA斷裂使細胞質內出現(xiàn)核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片斷組成，可用ELISA法檢測。
（一）檢測方法
1、將凋亡細胞裂解后高速離心，其上清液中含有核小體
2、在微定量板上吸附組蛋白體
3、加上清液使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結合
4、加速過氧化物酶標記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結合
5、加酶的底物，測光吸收度
（二）用途
該法敏感性高，可檢測5*100/ml個凋亡細胞。可用于人、大鼠、小鼠的細胞凋亡檢測。該方法不需要特殊儀器，適合基層工作，但是不能的測定凋亡細胞發(fā)生的量。