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细胞CDK2/CYCLIN A激酶活性荧光共振能量转移法定量
阅读：1242 发布时间：2015-4-7| 提 供 商 | 上海哈灵生物科技有限公司 | 资料大小 | 71.1KB |
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主要用途
细胞CDK2/CYCLIN A激酶活性荧光共振能量转移法（FRET）定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针EDANS供体和DABCYL受体双重标记的多肽底物，在CDK2/CYCLIN E抑制剂的存在下，受到CDK2/CYCLIN A的磷酸化后，不能被位点特异性氨基肽酶切离，而发生荧光峰值的降低，即采用荧光共振能量转移法来测定样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或*纯化酶样品中CDK2/CYCLIN A激酶的特异活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。
技术背景
细胞周期素依赖性激酶2（cyclin dependent kinase 2；CDK2；EC 2.7.11.22），又称为细胞分裂周期蛋白1（cell division cycle1；CDC1）或p33，属于丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家属成员之一。其与酵母细胞的cdc28和cdc2高度进化保留。细胞周期素依赖性激酶2的催化亚体，与细胞周期素E然后A结合，允许细胞由G1期进入DNA合成期，达到调节细胞生长、DNA复制、细胞分裂等。p21Cip1 （CDKN1A）and p27Kip1 （CDKN1B）是CDK2激酶的抑制剂。CDK2/CYCLIN A激酶的磷酸化目标序列为HHASPRK?；诹姿峄嚯木哂?/span>抗氨基肽酶切离的功能，通过荧光共振能量转移法（Fluorescence resonance energy transfer；FRET），即传递激发状态的能量由处于较短波长的供体（donor）到覆盖供体波长的受体（acceptor），使得距离依赖性反应的供体的散发光子淬灭（quench），使用2个荧光探针EDANS供体和DABCYL受体作为FRET对，来标记的CDK2多肽底物的两端，在氨基肽酶（aminopeptidase）的作用下，释放出强烈荧光的EDANS；一旦在CDK2/CYCLIN E抑制剂二氨基吡唑-1氢4-基偶氮酚【4-（3,5-diamiH-pyrazol-4-ylazo）-phenol】的存在下，底物受到CDK2/CYCLIN A的磷酸化（由ATP的γ-磷酸根到多肽上单一丝氨酸残基分子上），底物将不能被位点特异性氨基肽酶切离，而无法释放出EDANS，由此根据产物荧光强度（激发波长340nm，散发波长490nm）的降低，来定量测定细胞周期素依赖性激酶2/细胞周期素A的特异活性。CDK2/CYCLIN A反应系统为：