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脂氧合酶活性测定试剂盒使用说明
阅读：1182 发布时间：2024-8-19注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格：50 管/48 样
产品内容：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5mL 试剂二，充分溶解。
产品说明：
LOX 广泛存在于植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。
LOX 催化亚油酸氧化，氧化产物在 234nm 处有特征吸收峰；测定 234nm 吸光度增加速率，来计算 LOX 活性。
自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提?。?/span>
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
二、测定：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 234 nm，蒸馏水调零。
2.试剂二在 25℃水浴中预热 30 min。
3.空白管：依次在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 蒸馏水、800μL 试剂二和 100μL 试剂三，迅速混匀后于 234nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A1 和 A2。
4.测定管：依次在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 上清液、800μL 试剂二和 100μL 试剂三，迅速混匀后于 234nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A3 和 A4。
注意：空白管只需测定一次。三、LOX 活性计算公式：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。
LOX (U/mg prot) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×1000
= 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。
LOX (U/g) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000
= 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W
Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒； V 样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1mL；V 反总：反应总体积，1mL；V 样总：上清液总体积，1mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1min。
注意事项：
1.试剂三易自发氧化，从而导致空白管测定值偏高，必须临用前配制，并且当天使用完毕。
2.样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。