化工仪器网技术文章
细菌核糖体（ribosome）分离试剂盒说明书
阅读：1275 发布时间：2022-12-13
细菌核糖体（ribosome）分离试剂盒产品说明书
主要用途
细菌核糖体（ribosome）分离试剂是一种旨在通过化学破膜以及差速超速离心处理方法，分离出完整而纯化的70S核糖体组分的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种培养或临床细菌菌株核糖体成分的分离。产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶和蛋白酶污染，萃取纯度和产量皆高。
技术背景
核糖体（ribosome）是一种细小颗粒的核糖蛋白复合物（ribonucleoprotein complex），生命细胞制造蛋白质的非膜性结构元素和转译装置（translational apparatus），由RNA和蛋白质组成，具有多肽转移酶的活性，刺激RNA合成，并调节RNA、核糖体自身以及蛋白质的生物合成。其分成2个亚体：大亚体和小亚体。核糖体通过大亚体结合转运核糖体（tRNA），而小亚体结合信使RNA（mRNA），然后阅读RNA提供的信息，转译（translation）成氨基酸，连接成蛋白分子。真核生物的核糖体位于胞浆（游离核糖体）、线粒体和叶绿体中。其中胞浆核糖体为80S核糖体，由40S小亚体和60S大亚体组成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亚基和49个蛋白组成；而40S由18S RNA和33个蛋白组成。线粒体和叶绿体核糖体与原核生物相似，为70S核糖体，由30S小亚体和50S大亚体组成：50S包括5S、23S RNA和34个蛋白；30S包括16S RNA和21个蛋白。细菌核糖体成为抗菌药物的靶标，其中50%以上抗菌素针对细菌核糖体。同时核糖体高度进化保留，成为种系分类（phylogenetic classification）的分子标志。
产品内容
裂解液（Reagent A） 毫升
保存液（Reagent B） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
台式离心机：用于样品操作
超速离心机：用于样品操作
超声仪：用于裂解细胞
涡旋震荡仪：用于混匀
实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的试剂置于冰槽里冻融备用。然后进行下列操作。
1． 准备50毫升细菌（OD600=0.2或108细胞/毫升）
2． 转移到50毫升锥形离心管
3． 放进台式离心机离心30分钟，速度为3000g
4． 小心抽去上清液
5． 加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent A）
6． 涡旋震荡15秒，充分混匀
7． 超声处理100瓦功率，20秒一次重复4次
8． 置于冰槽里孵育30分钟，期间每隔5分钟涡旋震荡15秒
9． 放进4℃台式离心机离心15分钟，速度为15000g
10． 小心移取上清液到新的高速离心管
11． 放进超速离心机离心15分钟，速度为30000g
12． 小心移取上清液到新的高速离心管（注意：可以使用矿物油填满离心管）
13． 放进4℃超速离心机离心2小时，速度为100000g
14． 小心取出离心管
15． 小心抽去上清液
16． 加入500微升或xx毫升保存液（Reagent B），混匀颗粒群
17． 转移到新的1.5毫升离心管
18． （选择步骤）进行核糖体定量测定
19． 放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里准备后续操作
注意事项
1． 本产品为20次操作（5 X 109细胞/次）
2． 建议使用足够的细菌量
3． 样品操作均须在4℃或以下状态下进行
4． 操作时，须无菌操作，避免污染母液
5． 核糖体定量计算公式（微克/微升）： A260 ? 11.1
6． 如果进行核糖体蛋白萃取，建议使用纯化核糖体蛋白质萃取试剂盒—HL16041
7． 本公司提供系列核糖体分析技术产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定分离的核糖体维持正常活性
3． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶