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AO染色液吖啶橙说明书
阅读：2766 发布时间：2022-7-14Acridine Orange属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，吖啶橙嵌合到双链DNA中显绿色，与单链DNA或RNA结合时发桔黄色或橙红色荧光。
AO染色液(1mg/ml)为储存液，使用时应稀释到合适浓度后使用。染色后在荧光显微镜下观察，AO可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。AO使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。AO染色常与EB染色合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料：
荧光显微镜
低速离心机
PBS
细胞计数板
载玻片、盖玻片
操作步骤(仅供参考)：
收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用PBS清洗细胞1次，计数并调节细胞浓度至106/ml。
取适量的细胞悬液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，使AO终浓度为8.5～17μg/ml，轻轻混匀。
室温避光染色15～20min，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
荧光显微镜下观察(激发波长488nm)，计数并拍照。
染色结果：
正常细胞 单链DNA或RNA | 细胞被均匀染成黄绿色荧光 (发射波长510~540nm) |
凋亡细胞 双链DNA | 染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒(发射波长大于600nm) |
注意事项：
Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜剂，较少单独使用。
吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
如有低温离心机进行离心效果更佳。
操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。常温运输，4℃保存。