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主要用途
尼罗红荧光染色溶液是一种旨在通过与脂类物质的结合并发出荧光检测信号，快速、敏感、可靠
地活体定量测定细胞内脂类成分的常用荧光染料。适用于各种细胞包括细菌细胞，也用于蛋白质电泳染色。
产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰灵敏。 

技术背景
尼罗红染色剂（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一种亲脂性的恶嗪类荧光染
料。与脂类物质包括腊酯（wax ester）和三酰甘油（triacylglycerol）以及各种脂肪酸结合后，在激发波长
543nm 的激发下，显示强烈桔红色荧光（散发波长 598nm）。同时在紫外光的照射下显示红色。
产品内容
染色液（Reagent A） （0.5 毫克/毫升） 毫升
产品说明书 1 份
保存方式
保存 染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，避免光照，有效保证 6 月

用户自备
HANK 平衡盐缓冲溶液（ ）或 PBS 缓冲溶液（ ）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（ ）：用于细胞脱离
*细胞培养液（ ）：用于细胞处理所需的培养基
15 毫升锥形离心管：用于细胞收集的存放
微型台式离心机：用于细胞沉淀收集
台式离心机：用于细胞沉淀收集
1.5 毫升离心管：用于细胞检测操作的容器
2 毫升离心管：用于染色工作液配制的容器
37℃培养箱：用于孵育反应物
比色皿：用于荧光定量分析
荧光显微镜：用于观察荧光细胞
荧光分光光度仪：用于定量检测荧光细胞和脂类产量

实验提示
方法一、间接法
实验开始前，将试剂盒里的 染色液（Reagent A）冻融，置入冰槽里。然后进行下列操作。
1． 开启荧光显微镜或荧光分光光度仪
2． 小心抽掉 25cm2
细胞培养瓶里的培养液
3． 加入 3 毫升用户自备的 HANK 平衡盐缓冲溶液或 PBS 缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面
4． 小心抽掉清洗液
5． 加入 1 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面
6． 置入 37℃培养箱 1 分种
7． 振动培养瓶，使细胞脱落
8． 加入 5 毫升用户自备的*细胞培养液
9． 移入 15 毫升锥形离心管
10．放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g 
11．小心抽去上清液
12．加入 xx 毫升用户自备的 HANK 平衡盐缓冲溶液或 PBS 缓冲溶液，充分混匀
13．移入到新的 1.5 毫升离心管
14．加入 xx 微升 染色液（Reagent A）到离心管
15．用手指轻轻弹动离心管，使其充分混匀
16．在 37℃培养箱孵育 10 分钟，避免光照
17．放进微型台式离心机离心 30 秒，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
18．小心抽去上清液
19．加入 1 毫升用户自备的 HANK 平衡盐缓冲溶液或 PBS 缓冲溶液，充分混匀
20．（选择步骤）放进微型台式离心机离心 30 秒，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
21．（选择步骤）小心抽去上清液
22．（选择步骤）加入 1 毫升用户自备的 HANK 平衡盐缓冲溶液或 PBS 缓冲溶液，充分混匀
23．检测方法
A） 荧光显微镜定性分析
1） 移出 10 微升离心管中的混匀物到载玻片上
2） 放上盖玻片或封片
3） 在荧光显微镜下观察荧光细胞：激发波长 543nm，散发波长 598nm――显示强烈桔红色荧
光细胞的为脂类丰富的阳性细胞
B） 荧光分光光度计定量分析
1） 移取 1 毫升细胞悬液到 1 毫升比色皿
2） 放进荧光分光光度计测读：激发波长 543nm，散发波长 598nm――确定活体细胞脂类产量
方法二：直接法
实验开始前，将试剂盒里的 染色液（Reagent A）冻融，然后移出 2 毫升用户自备的 HANK 平
衡盐缓冲溶液或 PBS 缓冲溶液到 2 毫升离心管，加入 2 微升 染色液（Reagent A），混匀后，置
入冰槽里，标记为 染色工作液。然后进行下列操作。
1． 开启荧光显微镜
2． 小心抽掉 25cm2
细胞培养瓶里的培养液
3． 加入 3 毫升用户自备的 HANK 平衡盐缓冲溶液或 PBS 缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面
4． 小心抽掉清洗液
5． 加入 2 毫升 染色工作液
6． 在 37℃培养箱孵育 10 分钟，避免光照
7． 在荧光显微镜下观察荧光细胞：激发波长 543nm，散发波长 598nm――显示强烈桔红色荧光细胞的为
脂类丰富的阳性细胞
注意事项
1． 本产品为 1 毫升（0.5 毫克/毫升）规格
2． 操作时须戴手套
3． 用户可以参考本产品的操作步骤用于细胞分析
4． 本产品可用于识别、定量、以及动态观察细胞脂类物质变化
5． 尼罗红为通透性的染料，可以自由进入细胞
6． 根据细胞株的差异，可以适当调整染料剂量，以增强或降低荧光强度
7． 细胞培养液里避免使用脂类物质
8． 孵育时，必须避免光照
9． 使用时，避免污染母液
10．建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析
11．荧光波长可以用激发波长 475nm，散发波长 580nm 替代
12．建议使用本公司的相关产品进行细菌或蛋白方面的尼罗红染色分析
13．本公司提供系列尼罗红检测试剂产品
 
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰