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组织肉毒碱棕榈酰转移酶总活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
阅读：2980 发布时间：2017-11-27主要用途
组织肉毒碱棕榈酰转移酶（CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE）总活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过肉碱和脂酰辅酶A反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂后，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体等）肉毒碱棕榈酰转移酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
脂肪酸β氧化过程（β-oxidation）在动物组织的线粒体发生的脂肪酸代谢通路，可概括为活化、转移、β氧化及后经三羧酸循环被*氧化生成CO2和H2O，并释放能量等四个阶段。大于10个碳（C10）的活化型长链脂酰辅酶A是不能直接透过线粒体内膜，需要借助肉碱（camitine），即L-3羟-4-*基铵丁酸，而被转运入线粒体内，在线粒体内膜的外侧及内侧分别有肉碱脂酰转移酶（carnitine palmitoyl transferase；CPT；EC2.3.1.21）I和Ⅱ。位于内膜外侧的酶Ⅰ，促进脂酰CoA转化为脂酰肉碱，后者可借助线粒体内膜上的转位酶（或载体），转运到内膜内侧，然后，在酶Ⅱ催化下脂酰肉碱释放肉碱到胞浆，留下脂酰CoA。由此位于胞浆的活化脂肪酸―脂酰CoA穿过线粒体内膜进入基质而被氧化分解。肉碱脂酰转移酶缺失症导致机体无法代谢脂肪酸?；谌饧詈椭８窤在肉碱脂酰转移酶的作用下，产生脂酰肉碱，并释放出巯基辅酶A（CoA-SH），与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5,-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析肉碱脂酰转移酶的总活性。
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
台式离心机：用于样品操作
比色皿或96孔板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
注意事项
1．本产品为20次（比色皿）和80次（96孔板）操作
2．操作时，须戴手套
3．建议使用纯化线粒体（10微克）作为待测样品为佳
4．建议使用比色皿测定
5．样品须澄清，至关重要
6．加样后3秒内比色测定
7．测定值由低到高变化；测定可持续15分钟
8．比色测定后，比色皿须清洗*
9．样本测定15分钟读数高于0分钟读数表明具有酶活性
10．如果待测样本为总蛋白，其蛋白浓度为100微克/50微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）
11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12．肉毒碱棕榈酰转移酶单位活性定义为：在25℃，pH 7.4条件下，每分钟内能够释放1微摩尔辅酶A所需的酶量作为一个活性单位
13．本公司提供系列脂肪酸代谢检测试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感