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HL30044.4.1 v.A 可溶性包涵体蛋白复性（化学稀释I）试剂盒产品说明书

主要用途

可溶性包涵体蛋白复性（化学稀释I）试剂是一种旨在使用化学稀释方法，使可溶性变性纯化蛋白重新折叠，恢复其蛋白功能和活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种可溶性纯化蛋白，尤其是细菌内重组蛋白（融合蛋白）以及可溶性处理的包涵体蛋白。可后续用于蛋白功能、酶活性等分析。产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作便捷，复性效果理想。

技术背景

在蛋白纯化和融化过程中，特别是包涵体蛋白，变性剂（denaturant）提供了有效的手段，其获得的纯化蛋白属于变性蛋白（denatured protein）。为了使变性蛋白恢复为天然蛋白（native protein），即具有蛋白质的自然结构和活性，需要进行蛋白复性（renaturation）或重新折叠（refolding）。蛋白复性是一个复杂的过程，诸如pH、离子强度、低分子添加剂、氧化还原电位（redox potential）和温度等物化因子，影响体外蛋白复性的效率。通常体外复性的方法包括稀释法和缓冲交换法。前者通过化学处理，而后者采用物理方法（例如透析、膜过滤（diafiltration）、凝胶过滤层析（gel-filtration chromatography）等，以达到蛋白复性的效果。L-精氨酸（L－arginine）、聚乙二醇（PEG）、硫代甜菜碱（sulfobetaine）、去垢剂、变性剂等将影响化学稀释复性处理的效率。

产品内容

稀释液（Reagent A） 10毫升

还原液（Reagent B） 5毫升

平衡液（Reagent C） 5毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存在-20℃冰箱里， 避免光照，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品保存的容器

恒温摇床：用于反应孵育

实验步骤

方法一：还原复性

1．准备好可溶性纯化变性蛋白样品

2．移取适量的蛋白样品到1.5毫升离心管

3．加入适量的稀释液（Reagent A）调整蛋白浓度到10毫克/毫升

4．移取100微升蛋白样品到新的1.5毫升离心管

5．加入900微升还原液（Reagent B）

6．放进20℃恒温摇床孵育4小时，速度为200RPM

7．（选择步骤）移取10微升进行生物检测，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受体结合实验等确定复性蛋白活性值

8．即刻放进－70℃冰箱里保存

方法二：

平衡复性

1．准备好可溶性纯化变性蛋白样品

2．移取适量的蛋白样品到1.5毫升离心管

3．加入适量的稀释液（Reagent A）调整蛋白浓度到5毫克/毫升

4．移取5微升蛋白样品到新的1.5毫升离心管

5．加入195微升平衡液（Reagent C）

6．放进28℃恒温摇床孵育2小时，速度为200RPM

7．（选择步骤）移取10微升进行生物检测，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受体结合实验等确定复性蛋白活性值

8．即刻放进－70℃冰箱里保存

注意事项

1．本产品为5次操作（还原和平衡各5次）

2．操作时须戴手套

3．本产品的复性效率达15至30％

4．建议与本公司系列包涵体蛋白溶解试剂盒配套使用

5．由于样品的特异性，用户可以优化温度、孵育时间、蛋白浓度，以获得大复性效率

6．如果复性效率过低，建议使用可溶性包涵体蛋白复性（物理透析）试剂盒－HL30044.5

7．如果获得满意的复性效果，用户可以按比例扩大复性容量

8．本公司提供系列包涵体蛋白处理试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定无蛋白酶污染