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技術(shù)文章

500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液

閱讀:2748          發(fā)布時間:2017-1-18

500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液產(chǎn)品說明書(中文版)

 

主要用途

 

500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液是一種旨在模擬超氧化物歧化酶的功能,清除超氧自由基陰離子的輔助試劑。其適用于氧化應(yīng)急活性氧研究。其適用于各種細(xì)胞培養(yǎng)、動物實驗中超氧自由基陰離子的清除。產(chǎn)品即到即用,嚴(yán)格無菌,性能穩(wěn)定,高純活性。

 

技術(shù)背景

 

4-羥基-2,2,6,6,-四甲基哌啶氧(4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxy;TEMPO)是一種自旋標(biāo)記(spin label)的水溶性穩(wěn)定哌啶氮氧化合物(piperidine nitroxide),分子式是C9H18NO2,分子量為172.24。其主要作用在于自由通過質(zhì)膜,具有超氧化物歧化酶的功能,清除超氧自由基陰離子,起到活性氧的解毒作用,同時具有神經(jīng)保護(hù)、抗炎和鎮(zhèn)痛作用。 

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清除Reagent A   毫升

產(chǎn)品說明書        1

 

保存方式

 

保存在-20℃冰箱里,避免光照;有效保證6

 

用戶自備

 

*細(xì)胞培養(yǎng)液:用于支持細(xì)胞生長的營養(yǎng)液

細(xì)胞培養(yǎng)板(瓶):用于細(xì)胞培養(yǎng)的容器

蓋玻片:用于細(xì)胞生長的載體

臺式離心機(jī):用于懸浮細(xì)胞的收集

細(xì)胞培養(yǎng)箱:用于細(xì)胞孵育

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

 

實驗提示

 

實驗開始前,將-20冰箱里的清除劑Reagent A置于冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作:

 

方法一:貼壁細(xì)胞處理

 

  • 在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的1孔放置蓋玻片
  • 加入2毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
  • 加入1毫升待測細(xì)胞(1至5 X 105細(xì)胞)
  • 輕輕搖動,使細(xì)胞均勻分布
  • 放進(jìn)37細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育,直至細(xì)胞生長到50%鋪滿率
  • 小心抽掉細(xì)胞培養(yǎng)液
  • 加入3毫升新鮮的用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
  • 加入xx微升清除劑Reagent A
  • 輕輕搖動培養(yǎng)板,混勻
  • 放進(jìn)37細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時
  • 小心抽掉含有清除劑Reagent A細(xì)胞培養(yǎng)液
  • 繼續(xù)后續(xù)操作

 

方法二:懸浮細(xì)胞處理

 

  • 準(zhǔn)備1個25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶
  • 加入2毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
  • 加入1毫升待測細(xì)胞(5 X 105細(xì)胞)
  • 輕輕搖動,使細(xì)胞均勻分布
  • 放進(jìn)37細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時
  • 小心移出細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管
  • 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為300g
  • 小心抽掉上清液
  • 加入3毫升新鮮的*細(xì)胞培養(yǎng)液,混勻細(xì)胞顆粒群
  • 加入xx微升清除劑Reagent A
  • 輕輕搖動離心管,混勻
  • 放進(jìn)37細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時
  • 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為300g
  • 小心抽掉含有清除劑Reagent A細(xì)胞培養(yǎng)液
  • 繼續(xù)后續(xù)操作

 

方法三:動物實驗

 

  • 準(zhǔn)備1個待測的實驗動物
  • 靜脈注射xx清除劑Reagent A/100克動物體重 
  • 或腹腔注射xx微清除劑Reagent A/100克動物體重 
  • 或輸液/灌注xx至xx微升清除劑Reagent A/100克動物體重
  • 注射后30分鐘至4小時繼續(xù)后續(xù)麻醉、斷頸椎、解剖、組織制片等操作

 

注意事項

 

  • 本產(chǎn)品為1毫升規(guī)格(100倍濃度)
  • 本產(chǎn)品即到即用,無需進(jìn)行任何處理
  • 使用時,戴好手套
  • 避免反復(fù)凍融
  • 使用時,避免污染母液
  • 細(xì)胞孵育時間可以根據(jù)用戶的具體情況調(diào)整,通常為6小時至24小時
  • 動物實驗可以每天注射,持續(xù)1周,然后觀察分析

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